Identificazione dei roditori I

La corretta identificazione degli animali da laboratorio è un requisito fondamentale della ricerca biomedica. È essenziale che gli sperimentatori siano in grado di distinguere tra i singoli animali in modo che l’animale corretto venga utilizzato per le procedure sperimentali e la raccolta dei dati. Gli scienziati hanno sviluppato diversi metodi permanenti e temporanei per identificare i singoli animali da laboratorio. Qui, discuteremo i due metodi più comunemente usati: ear tagging e ear punching.

Prima di approfondire la procedura per la punzonatura dell’orecchio, introduciamo il codice del punzone dell’orecchio, i tipi di pugni disponibili e discutiamo i vantaggi e gli svantaggi di questo metodo. Come avrai intuito, la punzonatura dell’orecchio comporta la perforazione di un foro o di una tacca nell’orecchio esterno o nella pinna dell’animale. Al fine di standardizzare questo metodo, sono stati sviluppati codici universali di punzonatura auricolare.

A seconda della posizione, le tacche sull’orecchio destro rappresentano cifre singole, come 1, 3 e 5, e una doppia tacca rappresenta 2. Utilizzando diverse combinazioni di queste tacche e sommando il valore per ogni tacca, è possibile etichettare l’animale da 1 a 9. Allo stesso modo, sull’orecchio sinistro, le stesse tacche rappresentano le decine. E ancora, diverse combinazioni copriranno l’intervallo da 10 a 90. I fori al centro della pinna destra e sinistra rappresentano rispettivamente 100 e 200. E i fori in entrambi indicano 300. Pertanto, ad esempio, se si desidera etichettare l’animale 173, è necessario praticare un foro al centro dell’orecchio destro per 100, tre tacche nell’anno sinistro sommando il totale a 70 e una singola tacca nell’orecchio in alto a destra che rappresenta il posto dell’unità “tre”.

Ora, discutiamo i tre stili di punzoni per le orecchie disponibili in commercio: il pugno a forbice, il pugno al pollice e il pugno a leva. Ognuno di questi ha i suoi vantaggi e svantaggi.

Il pugno del pollice richiede un movimento di pizzicamento, ma è abbastanza piccolo da adattarsi a un tubo Eppendorf in modo che il tessuto dell’orecchio possa essere raccolto più facilmente. Ergonomicamente, il punzone a leva è più facile da usare rispetto al pugno al pollice, specialmente per le orecchie più spesse dei ratti più anziani. Il punzone a forbice non richiede un movimento di pizzicamento, evitando così affaticamento e lesioni del tunnel carpale.

Nonostante sia un metodo di identificazione rapido e semplice, la punzonatura dell’orecchio ha alcune limitazioni. In primo luogo, il codice di punzonatura dell’orecchio discusso sopra ha un limite superiore di 399, che può limitare l’uso di questo metodo in alcuni studi su larga scala. Un’altra limitazione è che la maggior parte degli animali deve essere afferrata alla collottola per leggere il codice, aumentando così i tempi in cui vengono maneggiati. Man mano che i ratti invecchiano, la pelle delle loro orecchie si ispessisce ed è difficile eseguire il pugno all’orecchio senza causare disagio significativo all’animale. Pertanto, è meglio eseguire i pugni all’orecchio sui giovani ratti mentre vengono svezzati. Per i ratti adulti che richiedono l’identificazione, l’uso dell’anestesia inalante deve essere considerato quando si eseguono pugni all’orecchio.

Ora che hai alcune informazioni di base sul codice del punzonatura dell’orecchio e sui tipi di strumenti disponibili, impariamo come eseguire questa tecnica nei topi.

Prima di iniziare la procedura, si consiglia di pulire gli strumenti di punzonatura con una soluzione disinfettante,risciacquati con alcool e asciugati accuratamente. Evitare l’autoclave dei pugni all’orecchio, in quanto alla fine li opacizzerà.

Per iniziare, decidi il codice sperimentale dell’animale e il pugno da utilizzare. Usiamo il codice 173 e il pugno a forbice come esempi qui. La stessa procedura è applicabile a qualsiasi altro codice o punzone. Quando sei pronto, trattielo afferrandolo alla collottola in modo che le orecchie siano facilmente accessibili. Inizia con il foro per 100. Posizionare l’orecchio destro nel pugno in modo che il foro del punzone sia posizionato lontano dal margine della pinna. Quindi, applicare una pressione per chiudere la forbice rapidamente e con fermezza per tagliare la pelle. Quindi, rilasciare il pugno e rimuoverlo dall’orecchio. Evitare di tirare o torcere il pugno per evitare di strappare l’orecchio. Per fare una tacca, posizionare il pugno sul bordo della pinna dell’orecchio nel punto corretto, in questo caso nella parte superiore dell’orecchio destro per il “tre” nella posizione dell’unità del codice, e fare lo stesso – applicare una pressione rapida e ferma e quindi aprire la forbice per rimuoverlo. Ripeti la stessa procedura sull’altro orecchio per perforare tre tacche – due per “20” vicino all’angolo esterno e una per “50” vicino all’angolo interno, totalando il codice su “70”.

Verificare che il codice corretto sia stato perforato prima di aggiungere l’animale alla gabbia. Ancora una volta, pulire il pugno con un disinfettante, risciacquare con alcool e asciugarlo accuratamente per evitare la ruggine.

Ora, passiamo all’ear tagging, che è un altro metodo economico e facile da eseguire per l’identificazione individuale di topi e ratti. Ci sono una varietà di marchi auricolari disponibili in commercio. Questi includono: tag metallici che hanno una serie di numeri e / o lettere incisi su di essi e tag di plastica con caratteri o codici a barre su sfondi dai colori vivaci.

Uno svantaggio dei tag metallici è che spesso è necessario raccogliere l’animale per leggere il codice. Al contrario, le etichette di plastica sono facili da leggere senza dover maneggiare gli animali. Un altro vantaggio dei tag di plastica è la loro compatibilità con l’imaging MRI. Mentre i tag forniscono un identificatore individuale per un topo o un topo, non sono infallibili. I tag possono essere persi a causa di eccessiva toelettatura, dermatite o infezione, autotratto inflitto cercando di rimuovere i tag a causa di intolleranza, combattimenti e comportamento di riproduzione aggressivo. Se diversi animali sono alloggiati nella stessa gabbia, la perdita di un marchio auricolare può essere fastidiosa. Per aggirare questo problema, è necessario utilizzare una forma secondaria di identificazione come un codice di punzonatura sull’orecchio opposto al tag. Una struttura dovrebbe standardizzare sia la scelta dell’orecchio da etichettare che il codice da utilizzare sull’altro orecchio, e tutti i codici dovrebbero essere indicati sulla scheda della gabbia.

Ora impariamo come applicare correttamente un marchio auricolare, poiché un posizionamento errato può avere diverse conseguenze sfortunate. Dopo l’applicazione, discuteremo anche della rimozione del marchio auricolare, che di solito viene eseguita in caso di infezione dovuta all’applicazione del tag.

Il primo passo è selezionare un tag appropriato per gli animali da identificare. Qui, useremo un tag metallico per dimostrare la procedura sui topi. Assicurati di ordinare l’applier appropriato per le dimensioni e lo stile specifici dei marchi auricolari utilizzati. Rimuovere delicatamente l’etichetta dal supporto di cartone e orientarla nell’applier in modo che l’estremità con il foro sia posizionata sopra l’area dentellata dell’applier. L’estremità appuntita del tag dovrebbe essere opposta alla tacca.

Quando sei pronto per applicare il marchio auricolare, trattieni l’animale in modo che le orecchie siano facilmente accessibili. Gli animali possono avere meno probabilità di lottare se gli arti posteriori possono poggiare su una superficie come la parte superiore della gabbia o un piano di lavoro. Una volta che l’animale è trattenuto, posiziona profondamente la punta del marchio auricolare nella concha dell’orecchio in modo che i numeri del tag siano rivolti verso la parte posteriore dell’animale. Quindi, spremere saldamente l’applier chiuso; il marchio auricolare forerà l’orecchio e si bloccherà insieme. Quando rilasci, l’orecchio taggato cadrà dall’applier. Verificare che il tag sia stato posizionato e applicato correttamente. Se preferisci avere i numeri del marchio auricolare rivolti verso il naso dell’animale, posiziona il punto del tag alla base della pinna sul retro dell’orecchio e quindi stringi per bloccare il tag in posizione.

Le etichette devono essere posizionate in modo tale da non causare una curva nell’orecchio, interferire con la mobilità dell’animale o catturare qualsiasi parte dell’ingabbiamento. Se il tag è posizionato troppo vicino al bordo dell’orecchio, può essere facilmente strappato. Se posizionata troppo vicino alla testa, la pelle della zona del collo può catturare il tag, creando irritazione, dolore e movimenti limitati, che possono quindi portare a auto-trauma. Occasionalmente, le etichette metalliche possono causare irritazione e gonfiore dell’orecchio. Questo spesso porta a infezioni della pinna e il trattamento immediato dovrebbe includere la rimozione del tag.

Per rimuovere il tag, inumidire un applicatore con punta di cotone con una soluzione antisettica e utilizzarlo per rimuovere eventuali detriti intorno al tag. Nei casi gravi di infezione, l’animale potrebbe aver bisogno di essere anestetizzato. Quindi, utilizzando le frese a filo, tagliare la parte superiore del loop del tag da un bordo all’altro. È importante sottolineare che non tagliare la superficie piana in quanto ciò comprimerà il tag, pizzicherà l’orecchio e causerà danni all’orecchio. Usando gli omestati, guida delicatamente il marchio auricolare attraverso e fuori dall’orecchio. Far scivolare il tag in modo che l’estremità crimpata non passi attraverso causando traumi e allargamento del foro di perforazione. Una volta che l’etichetta è sparita, pulire l’orecchio con un bastoncino di applicatore di cotone imbevuto di antisettico e riportare l’animale nella sua gabbia. Se c’è una scarica purulenta dall’orecchio, può essere necessario un trattamento di follow-up e si raccomanda la consultazione con il personale veterinario per la valutazione.

Ora che sai come contrassegnare gli animali da laboratorio usando marchi auricolari e pugni, esaminiamo alcuni esperimenti in cui questi metodi possono essere utili. Uno dei principali vantaggi dell’utilizzo del codice di punzonatura dell’orecchio è che i punzoni possono raddoppiare come campioni di tessuto per la genotipizzazione, riducendo così lo stress per gli animali causato dalla manipolazione ripetuta. Tuttavia, se si prevede di utilizzare i punzoni per la raccolta di campioni pcr, ricordarsi di immergere prima l’apparecchio in una soluzione decontaminante superficiale per almeno 3 minuti per rimuovere il DNA residuo o l’RNA, quindi risciacquare con alcool prima dell’uso.

L’importanza della tecnica di identificazione aumenta ulteriormente se l’esperimento dura diversi giorni. Ad esempio, in questo esperimento gli scienziati hanno prima etichettato gli animali usando un tag metallico e poi hanno iniettato il nervo sciatico con una sospensione di cellule tumorali transgeniche che esprimono la proteina luciferasi. Successivamente, al fine di quantificare la progressione del cancro, hanno ripreso gli animali usando la bioluminescenza a uno, dieci e diciotto giorni dopo l’iniezione.

Hai appena visto la presentazione di JoVE che dimostra i due metodi di identificazione comunemente usati nei roditori: marchi auricolari e punzoni per le orecchie. Ora dovresti capire il codice del punzone auricolare, conoscere i diversi tipi di marchi auricolari per roditori disponibili in commercio e dovresti essere in grado di eseguire con precisione queste procedure senza causare un significativo disagio agli animali.

Ricorda, ogni tecnica ha i suoi vantaggi e svantaggi, che devono essere considerati in relazione alle tue esigenze sperimentali. Oltre a considerare i costi, la facilità della tecnica e il livello di dolore per gli animali dovrebbero essere alcune delle considerazioni principali nella scelta del metodo di identificazione appropriato. Come sempre, grazie per aver guardato!