6.10: Uso corretto delle autoclavi

1. Indossare adeguati dispositivi di protezione individuale (DPI)

Le condizioni operative ad alta pressione e temperatura incontrate durante l'autoclave comportano potenziali rischi di bruciatura o esplosione di calore. I DPI appropriati includono un cappotto da laboratorio, occhiali di sicurezza, guanti resistenti al calore e scarpe chiuse; questi devono essere indossati durante il carico e lo scarico dei materiali dall'autoclave. Quando si tratta di campioni liquidi, indossare un grembiule e una visiera come DPI aggiuntivi.

2. Preparazione dei materiali da caricare

1. Identificare il materiale compatibile con l'autoclave e il materiale incompatibile con l'autoclave
   Sebbene l'autoclave rappresenti un metodo comunemente usato ed economico per la decontaminazione, non tutti i materiali sono adatti per l'autoclave a causa delle condizioni di lavoro ad alta pressione e temperatura. In generale, tutti i materiali che evaporano o si fondono sotto il vapore ad alta pressione non sono compatibili con l'autoclave. Ciò include materiali come solventi organici, plastica scarsamente resistente al calore come polistirene, polietilene e metalli escluso l'acciaio inossidabile. Mai autoclave infiammabile, corrosiva, tossica, reattiva o radioattiva. I materiali compatibili per l'autoclave includono vetro borosilicato Pyrex o tipo I, polipropilene, policarbonato, guanti, acciaio inossidabile, punte per pipette, carta (inserita in sacchetti per autoclave) e soluzioni multimediali.
2. Materiale di imballaggio
   Dopo aver identificato i materiali compatibili con l'autoclave, è importante anche un imballaggio adeguato poiché garantisce sicurezza e autoclave efficiente. Ecco i principi di base quando si imballano i materiali:
   1. Utilizzare sempre un contenitore secondario in polipropilene o acciaio inossidabile.
   2. Per i campioni liquidi, riempire il flaconcino di circa 1/2 pieno e allentare i tappi o utilizzare chiusure ventilate. Non riempire mai i contenitori oltre i 2/3 pieni con il tappo completamente serrato.
   3. Ispezionare il recipiente di vetro per assicurarsi che non ci siano crepe. Se vengono identificate crepe, smaltire i bicchieri in un recipiente appropriato. Mai autoclave un noto vaso di vetro rotto.
   4. Utilizzare sempre sacchetti compatibili con l'autoclave per confezionare i rifiuti. I sacchetti devono avere nastri di indicazione su di esso e devono essere aperti alle estremità prima del caricamento per consentire il vapore all'interno del sacchetto.
   5. Non sovraccaricare mai i sacchetti o il contenitore per consentire un flusso di vapore sufficiente per una sterilizzazione completa. Lascia spazio tra gli elementi.
   6. Non mescolare materiali incompatibili.
   7. Non mettere mai oggetti taglienti nel sacchetto dei rifiuti.

3. Carica materiale

1. Controllare l'interno dell'autoclave per assicurarsi che non rimanga alcun potenziale pericolo da parte dell'utente precedente.
2. Pulire lo scarico prima di caricare i materiali per consentire una buona circolazione.
3. Assicurarsi che i sacchetti non tocchino le pareti interne dell'autoclave per evitare di sciogliersi.
4. I liquidi e i materiali secchi richiedono cicli diversi e devono essere autoclavati separatamente.
5. Chiudi saldamente la porta.

4. Funzionamento dell'autoclave

1. Solo il personale addestrato dovrebbe essere autorizzato a utilizzare autoclavi. Fare riferimento al manuale dell'apparecchiatura, se necessario, poiché i protocolli operativi variano tra le diverse autoclavi.
2. Dopo essersi assicurati che la porta dell'autoclave sia ben chiusa, impostare la temperatura dell'autoclave a 121 °C e mantenere una pressione di almeno 15 psi.
3. Per impostare il tempo e il ciclo dell'autoclave, è necessario considerare i seguenti fattori:
   1. Raccomandazioni sull'attrezzatura dal manuale del produttore.
   2. Il tipo di materiali caricati all'interno: secco o liquido.
   3. Le quantità di materiale o di materiale caricato.
   4. Forma e dimensione del contenitore utilizzato.
   5. Conducibilità termica del contenitore e dei materiali.
   6. Scopo della decontaminazione.

5. Scarico di materiale/i autoclavato(i)

1. Indossare DPI adeguati come descritto sopra.
2. Assicurarsi che la temperatura e la pressione dell'autoclave siano tornate a un intervallo di sicurezza.
3. Stare dietro la porta e aprire con attenzione la porta per rilasciare il vapore residuo all'interno dell'autoclave nella stanza.
4. Lasciare riposare i materiali all'interno dell'autoclave per 10 minuti per rilasciare vapore o aria calda intrappolati all'interno del materiale.
5. Non agitare alcun materiale liquido mentre lo si rimuove dall'autoclave. Se necessario, etichettare il materiale come caldo per evitare ustioni da calore a un individuo che potrebbe essere potenzialmente inconsapevole del fatto che il materiale è stato recentemente autoclavato.
6. Attendere che il materiale si raffreddi a temperatura ambiente prima di trasportare all'interno del laboratorio o all'esterno del laboratorio. In entrambi i casi, assicurarsi di utilizzare un contenimento appropriato per il trasporto.
7. Registrare i dettagli dei materiali e delle condizioni di autoclave nel registro di un utente.

L'autoclave è uno dei metodi più comunemente utilizzati in laboratorio ai fini della decontaminazione.

Molti scienziati, in particolare quelli che lavorano con campioni biologici, hanno bisogno di attrezzature e terreni sterilizzati e le autoclavi forniscono un modo rapido ed economico per decontaminare i materiali. Usano il vapore ad alte temperature e pressione per uccidere i microrganismi. A causa di queste condizioni estreme, tuttavia, devono essere usati con attenzione.

Questo video illustrerà come funzionano le autoclavi e come utilizzarle correttamente.

In un'autoclave, i materiali vengono riscaldati con vapore a temperature di 121 gradi Celsius a pressioni di almeno 15 p.s.i. Dopo almeno 30 minuti, queste condizioni disidratano e uccidono le cellule.

Le autoclavi possono sterilizzare sia materiali liquidi che solidi, ma è necessario considerare diverse impostazioni operative. I liquidi richiedono tempi più lunghi rispetto ai solidi per scaricare il vapore, al fine di prevenire l'ebollizione rapida. Inoltre, volumi maggiori di materiali liquidi impiegano più tempo a riscaldarsi fino alla temperatura corretta.

Non tutti i materiali sono in grado di resistere alle temperature all'interno di un'autoclave. Pertanto, non sterilizzare mai in autoclave nulla che si sciolga, bruci, sia esplosivo o liquidi che evaporeranno. Inoltre, non sterilizzare in autoclave sostanze chimiche tossiche o radioattive.

Ora vi mostreremo come preparare i campioni per l'autoclave e come utilizzarne una.

Innanzitutto, seleziona i materiali che intendi sterilizzare in autoclave e utilizza solo contenitori e strumenti compatibili. Per la sterilizzazione in autoclave possono essere utilizzati pirex, vetro borosilicato, acciaio inossidabile, polipropilene e policarbonato.

Sono compatibili anche altri materiali di laboratorio comuni, come puntali e scatole per pipette. La carta può essere sterilizzata in autoclave in sacchetti compatibili con l'autoclave.

I rifiuti solidi possono anche essere sterilizzati in autoclave in un apposito sacchetto. Lasciare spazio in questo sacchetto per consentire al vapore di circolare e legare le estremità. Infine, prima di procedere in autoclave, assicurati di creare una piccola apertura nel sacchetto per consentire l'ingresso del vapore.

Per i terreni acquosi e altri campioni liquidi compatibili, utilizzare un contenitore intatto e privo di crepe. Riempi il contenitore per circa metà e mai per più di due terzi.

Per ventilare i gas da un contenitore di liquidi, allentare il tappo. Se non c'è il tappo, coprire senza stringere con un foglio di alluminio per evitare la contaminazione del materiale autoclavato.

Mettere tutti i materiali in un contenitore secondario in polipropilene o acciaio inossidabile. Separare i materiali solidi e liquidi da sterilizzare in autoclave. Lascia spazio tra i materiali e non riempire eccessivamente il contenitore.

Infine, attacca un pezzo di nastro adesivo per autoclave a tutti i materiali. Questo nastro è dotato di indicatori sensibili alla temperatura che diventano neri se viene raggiunta una temperatura sufficiente.

Quando si utilizza un'autoclave, indossare adeguati dispositivi di protezione individuale per proteggersi dai rischi di alte temperature e pressioni. Ciò include occhiali di sicurezza DPI standard, camici da laboratorio, scarpe chiuse e guanti resistenti al calore. Utilizzare un grembiule e una visiera quando si maneggiano campioni liquidi.

All'autoclave, aprire prima lo sportello e verificare la presenza di eventuali pericoli all'interno. Caricare separatamente i materiali liquidi e secchi, poiché richiedono cicli di autoclave diversi.

Per evitare lo scioglimento, assicurarsi che i materiali non tocchino le pareti. Garantire un buon flusso di calore mantenendo una distanza sufficiente tra i materiali. Infine, chiudere e sigillare la porta.

Autoclavi diverse hanno istruzioni operative diverse. I cicli possono essere impostati impostando manualmente la temperatura e l'ora o selezionando da un elenco preimpostato. In generale, utilizzare i cicli consigliati per il tipo di materiale che si sta decontaminando.

Esistono una varietà di cicli per solidi e liquidi, nonché per diverse quantità di materiale e rifiuti da sterilizzare in autoclave. Quando si esegue un ciclo, assicurarsi che la temperatura abbia raggiunto almeno 121 gradi Celsius e la pressione di almeno 15 p.s.i.

Dopo che il ciclo è terminato, assicurarsi che la pressione sia tornata a zero e che l'autoclave si sia raffreddata. Aprire con cautela lo sportello per far uscire il vapore residuo. Quindi, lasciare riposare i materiali per 10 minuti per rilasciare eventuali gas caldi. Il nastro dell'autoclave dovrebbe ora avere strisce nere o dire autoclavato su di esso, anche se questa non è una garanzia che la sterilizzazione sia avvenuta.

Indossando DPI adeguati, rimuovere i materiali, facendo attenzione a non agitare i campioni di liquido. Annotare l'utilizzo nel registro, compreso il tipo di sostanze e le eventuali circostanze speciali, se si verificano. Infine, trasportare i materiali in un'area sicura o in una cappa a flusso laminare per raffreddarli.

Hai appena visto l'introduzione di JoVE alle autoclavi. A questo punto è necessario capire quali materiali possono essere sterilizzati in autoclave, come prepararli e come utilizzare lo strumento in sicurezza. Grazie per l'attenzione!