Imaging di campioni biologici con microscopia ottica e confocale

1. Imaging confocale

1. Caricare il campione sullo stage. Centralo sotto l'obiettivo. Non deve superare il limite di peso del palcoscenico, che in questo caso è di 5 kg. Il campione non deve avere uno spessore superiore a 100 mm.
2. Apri il software di imaging e seleziona "Crea lavoro".
3. Sotto la colonna Topografie, scegli il pulsante assistente.
4. Crea un'immagine panoramica con l'ingrandimento più basso, 2,5X. Prima di cambiare gli ingrandimenti, assicurarsi che il campione sia a fuoco modificando la posizione Z fino a quando non viene visualizzata un'immagine chiara. Questo può essere fatto spingendo verso il basso o tirando verso l'alto il manipolatore del microscopio 3D. Il movimento Z più fine si ottiene impegnando il pulsante sul lato, che provoca una luce blu attorno ai bordi.
5. Aumentare lentamente l'ingrandimento dell'obiettivo, giocando continuamente con l'intensità della luce e la messa a fuoco fino a raggiungere l'ingrandimento desiderato. Se lo si desidera, scegliere un'area di interesse diversa spostando il palco nelle direzioni x e y utilizzando il manipolatore.
6. Una volta scattata un'immagine panoramica a basso ingrandimento, premere il pulsante Successivo per procedere al passaggio punto di riferimento. Se lo si desidera, specificare un determinato punto di riferimento ai fini della misurazione (ad esempio, l'angolo del campione), anche se a tale scopo il punto di riferimento predefinito va bene.
7. Premere la freccia successiva per passare alla parte successiva della procedura guidata.
8. Modificare l'obiettivo come desiderato per visualizzare una risoluzione appropriata per il campione. In questo caso, l'obiettivo 50X viene utilizzato per visualizzare le celle nel campione. Il 50X è l'obiettivo più vicino al campione, quindi spostati gradualmente fino all'obiettivo 50X assicurandoti che ci sia ancora spazio per ridurre la distanza di lavoro dopo l'obiettivo 20X.
9. Nella pagina "Definizione intervallo di misurazione", spostare leggermente la posizione Z (facendo clic sul pulsante laterale sul manipolatore per le regolazioni fini) in modo che solo la parte superiore del campione sia a fuoco e fare clic su "Imposta ultimo". Quindi spostare lo stage nella direzione Z (verso il basso) fino a quando solo la parte inferiore del campione è a fuoco e premere "Imposta per primo". Assicurarsi che il numero di sezioni calcolate non superi 1000 o il programma avrà esito negativo.
10. Assicurati che l'intensità della luce non si sovrasatura (causi pixel rossi) nell'immagine a nessuno dei livelli e quindi premi fatto. Questo prenderà l'immagine della tomografia e aprirà il software di tomografia.
11. Nel software di tomografia, aprire schede come la scheda Studi per visualizzare i dati in 3D e prendere misure nello spazio 2D o 3D.

2. Imaging digitale al microscopio ottico

1. Caricare il campione sullo stage. Centrare il campione sotto l'obiettivo. Il peso del campione non deve superare il limite di peso dello stadio, che in questo caso è di 4 kg. Il campione non deve essere superiore a 12 cm.
2. Aprire il software di imaging.
3. Selezionare un processo dall'elenco dei modelli forniti. È anche possibile lavorare al di fuori di un lavoro premendo Free Examination, che consente di studiare un campione al di fuori di un lavoro.
4. Acquisisci un'immagine panoramica che mostri l'intero palcoscenico. Questo servirà come mappa in seguito per visualizzare la parte dell'esempio che viene visualizzata. Durante l'acquisizione dell'immagine, utilizzare il controller per modificare la messa a fuoco e la posizione dell'immagine.
5. Posizionare un sistema di coordinate. Il sistema di coordinate predefinito si trova nell'angolo posteriore sinistro dello stage e va bene per questa applicazione. Se l'esempio è storto, è possibile regolare le coordinate qui.
6. Assegna un nome all'esempio e al processo, questo lo aggiunge all'elenco dei processi in modo che altri utenti possano tornare ad esso.
7. Selezionare il pulsante della fotocamera in Acquisisci. Scatta un'immagine iniziale, quindi premi il pulsante live mentre navighi nell'esempio.
8. Spostare lo stato attivo verso il basso fino a quando il campione non è chiaramente a fuoco. Potrebbe essere necessario regolare anche l'illuminazione nella scheda "Illuminazione e apertura".
9. Ottimizza l'immagine con gli strumenti del pannello Ottimizzazione immagine. È possibile giocare con diversi parametri nella scheda Miglioramenti immagine, ad esempio l'inclinazione dell'obiettivo, i livelli di illuminazione sul campione e la luminosità e il contrasto, fino a quando l'immagine non ha la nitidezza desiderata.
10. Eseguire le misurazioni toccando lo strumento Matita sul software. Da lì, hai accesso a diversi strumenti di misurazione, tra cui distanze, angoli e area. Utilizzare gli strumenti di distanza e area per misurare le dimensioni del campione.
11. Passare alla scheda Workflow risultati e controllare il layout del workflow per configurare il layout del report
12. Tocca il pulsante Salva per salvare il tuo lavoro in modo che altri possano utilizzare lo stesso flusso di lavoro.