Name: Cervello Banking: Utilizzare al meglio il vostro campioni di ricerca (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-24T16:02:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Scopri come preparare campioni cerebrali per il criostato e implementare un campionamento sistematico nel brain banking. Questo metodo garantisce la conservazione del materiale biologico per analisi stereologiche non distorte.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Gli autori desiderano ringraziare Ikiel Ptito per il suo continuo supporto tecnico.

Parte 1: Pre-trattamento dei tessuti <ol><li> Tessuto deve essere ben perfusi con paraformaldeide, glutaraldeide, o formalina. Questo può essere raggiunto attraverso standard di perfusione transcardial tipicamente usato per raccogliere altri organi. Nel presente studio il soggetto era profondamente sedato con cloridrato di ketamina (10 mg / kg, im), eutanasia con una dose eccessiva di sodio pentobarbital (25 mg / kg, iv) e perfusi transcardially con 0,1 M PBS fino a completo dissanguato. Questa è seguita da una soluzione di paraformaldeide al 4% in PBS per 5 min (~ 1 litro). </li><li> Il cervello deve essere stereotaxically bloccato, rimosso dal cranio, pesato, e il volume determinato 2. Il tessuto deve quindi essere crioprotetti in soluzioni di saccarosio classificato con una concentrazione finale di 30% di saccarosio in tampone fosfato. Blocchi di tessuto deve essere congelato in isopentano a -65 ° C e conservati a -80 ° C fino a quando si è pronti a fetta. </li></ol> Parte 2: campionamento sistematico <ol><li> Campionamento sistematico si basa su un piano adeguato prima di sezionamento. L&#39;intera regione di interesse in entrambe le estensioni rostrale-caudale e dorso-ventrale deve essere ben definito. Un atlante stereotassico delle specie in uso è utile per definire la regione di interesse e per determinare la lunghezza della regione di interesse. Una volta che la lunghezza della regione di interesse è determinato, è necessario stabilire l&#39;intervallo di campionamento. Per esempio, dal atlante stereotassico si stabilisce che l&#39;intero rostro-caudale estensione della regione di interesse è di circa tre millimetri di lunghezza Durante il taglio nel piano coronale. Quindi decide di impostare il criostato alla sezione a 50 micron, di questo passo si avrà 60 sezioni che coprono il rostrale-caudale estensione della regione di interesse. Per un tipico studio imparziale stereological 6-10 sezioni sistematicamente campioni sono necessari per ottenere risultati attendibili. In questo esempio 10 sezioni equidistanti in tutto il rostro-caudale risultato misura in un intervallo di campionamento di 1 / 6 sezioni. </li></ol> Parte 3: Creazione della banca del cervello <ol><li> Una volta che la frequenza di campionamento sezione è stato determinato, il passo successivo è quello di determinare che le macchie verrà eseguita immediatamente. Per esempio, se siete colorazione con violetto cresolo potrete catturare 1 / 6 sezioni su una diapositiva. Questo sarà serie 1. Se sai che forse diversi anticorpi potenziale che si desidera eseguire, ma entrambi vogliono vedere i dati che fornisce il vostro principale macchia o semplicemente non hanno il tempo per eseguire l&#39;immunoistochimica, posto il restante 5 serie di sezioni nell&#39;ordine in cui sono sono stati tagliati a preservare pozzetti contenenti antigeni (1 pirrolidone polivinile%, glicole etilenico al 50% in o.1M PBS, pH 7,4). La seguente tabella fornisce uno schema di campionamento composto da 1 scivolo e 1 piastra (standard piastra da 48 pozzetti) di sezioni come parte di una banca del cervello (Tabella 1). <img src="/files/ftp_upload/1260/table1.jpg" alt="Tabella 1" /> Tabella 1. La frequenza di campionamento sezione qui è 1 / 6. La prima sezione è posto su un vetrino per la colorazione violetto cresolo e il prossimo 5 sezioni sono poste in antigene preservare. Numero della sezione 7 è poi catturato sulla diapositiva e le sezioni 9-12 sono collocati in antigene preservare. Questo ciclo viene ripetuto fino a quando la regione di interesse o il blocco dei tessuti è esaustivo sezionato. </li><li> Il passo successivo è quello di sezione esaurientemente il blocco di tessuto. Mettere una piccola quantità di incorporare medio sul mandrino e farlo congelare. Posizionare il mandrino nella testa microtomo e radere abbastanza del mezzo congelato di avere una superficie piana. Rimuovere il mandrino dalla testa microtomo e luogo pianeggiante all&#39;interno del criostato. Versare incorporare medio sul mandrino e saldamente posto il blocco cervello con il lato stereotaxically taglio posizionato categoricamente sul mandrino. Incorporare lentamente e completamente il cervello in montaggio di media. Posizionare il mandrino con il cervello nella testa microtomo e la sezione con il pre-determinati parametri per la frequenza di campionamento sezione. </li><li> Una volta che il blocco di tessuto è stata esaurientemente sezionato e le sezioni sono collocati in pozzi, coprire la piastra con il coperchio, avvolgere il coperchio con parafilm, e mettere in un congelatore di -20 ° C. Registro il numero totale delle sezioni adottate per ciascuna serie, la sezione-intervallo di campionamento, e il numero di serie per ogni animale. Questo registro sarà vitale per tenere traccia di successiva rimozione di sezioni dalla banca cervello per immunoistochimica futuro. </li></ol> Parte 4: Risultati Rappresentante: Campionamento sistematico in questo modo è stata una pratica standard nel nostro laboratorio negli ultimi 3 anni. Abbiamo avuto un grande successo di immunoistochimica eseguire sul materiale che è stata conservata in antigene preservare tre anni dopo è stato tagliato senza deterioramento del segnale (Figura 1). Inoltre, come parte della nostra banca cervello che abbiamo registrato vicino a 20.000 sezioni sistematica della non-umanocervello dei primati (Figura 2) come parte della nostra piani a lungo termine della ricerca. <img src="/files/ftp_upload/1260/1260figure1.jpg" alt="" /> Figura 1. Questa è una sezione dal polo occipitale del primate non umano immunostained per NeuN mostrando sia VI livello e interstiziale neuroni della sostanza bianca. Questa particolare sezione è stato immagazzinato in antigene conservare a -20 ° C per un periodo di 2 anni. Barra di scala = 100μm. <img src="/files/ftp_upload/1260/1260fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. La nostra banca cervello cercopiteco ora è composta di quasi 20.000 sezioni sistematico da oltre 30 scimmie.

<ol><li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator.+Aat+Rec%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. Aat Rec.</a> 231, 482-497 (1991).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+Non-human+Primate+Brain+in+Stereotaxic+Space%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Campionamento sistematico è un metodo poco costoso scopo di massimizzare il materiale di ricerca. Questa strategia di campionamento è stato progettato per rispettare le regole di stereologia imparziale che richiede il campionamento sistematico in tutta la regione. E &#39;fondamentale che l&#39;ordine delle sezioni per ogni serie è mantenuta. Nel nostro laboratorio abbiamo utilizzato con successo questo metodo per il settore bancario sia criceto e non umani sezioni cervello dei primati. Finora abbiamo raccolto sezioni ce...

<table><tbody><tr><td>Glicole etilenico</td><td>Fisher Scientific</td><td>E178-4</td><td></td></tr><tr><td>Poli(vinilpirrolidone)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP431-500</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di inclusione Thermal Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cervello banking: utilizzare al meglio il vostro campioni di ricerca

Brain Banking: Making the Most of your Research Specimens

Tutti stereologia è un metodo per precisione ed efficienza stimare il numero totale dei neuroni (o tipo di cellula) in una data area di interesse<sup&gt; 1</sup&gt;. Per raggiungere questo obiettivo 60-10 sezioni sistematica dovrebbe essere sondato che copre l&#39;intera struttura. Tipicamente si tratta di elaborazione 1 / 5 sezioni che lascia una notevole quantità di materiale non trasformato. Al fine di massimizzare il materiale, vi proponiamo un metodo poco costoso per conservare tessuto fissato come parte di un piano a lungo termine di stoccaggio di ricerca. Come tessuto è tagliato e lavorato per il desiderato macchia o anticorpi, si alternano sezioni dovrebbero essere sistematicamente messo in antigene conservare a -20 ° C per elaborazioni future. Utilizzando piastre da 24 pozzetti, le sezioni possono essere messi in ordine per il recupero futuro. Utilizzando questo metodo, i tessuti possono essere conservati e trattati per immunoistochimica nel corso degli anni.

Banche del cervello e campionatura sistematica di materiale biologico costituisce la base per stereologia imparziale e massimizza il potenziale dei dati ottenuti da ogni campione.

Cervello Banking: Utilizzare al meglio il vostro campioni di ricerca

La stereologia non distorta (unbiased stereology) è un metodo per stimare in modo accurato ed efficiente il numero totale di neuroni (o di altri tipi cellulari) in una determinata area di interesse1. Per...

Per iniziare questa procedura, il blocco cerebrale deve essere preparato per il criostato e deve essere determinata la frequenza di campionamento delle sezioni. Successivamente, devono essere preparati l'antigene e i vetrini. Il blocco cerebrale deve essere posizionato sul mandrino all'interno del criostato.Una volta che il cervello è stato fissato in modo sicuro sul mandrino a uno spessore prestabilito, si devono ottenere sezioni sistematiche in modo che la serie uno venga posizionata su un vetrino, mentre le serie successive vengano collocate in pozzetti precedentemente riempiti con soluzione conservante per l'antigene. Una volta esaurito il blocco, si deve posizionare la piastra in un congelatore a meno 20 gradi Celsius come parte della propria banca del cervello. Salve, sono il dottor Mark Burke del Laboratorio di Neuroscienze Visive della Scuola di Ottometria dell'Università di Montreal.Ciao, sono la dottoressa Shahin Zur, anch'io del Laboratorio di Neuroscienze Visive della Scuola di Ottometria dell'Università di Montreal. Salve, sono il dottor Mo Petto, direttore del Laboratorio di Neuroscienze Visive della Scuola di Ottometria dell'Università di Montreal. Oggi vi mostreremo

brain-banking-making-the-most-of-your-research-specimens

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Descriviamo un modello murino del disturbo post traumatico da stress (PTSD) che rivela le alterazioni persistenti della funzione neuroendocrina e del ritardato a lungo termine, di risposta paura esagerata, caratteristici dei pazienti con PTSD. Il modello animale e metodi descritti qui sono utili per correlare biomarcatori nei nuclei del cervello, che sono meccanicistica ma non possono essere misurati nei pazienti, con biomarcatori nelle periferie globuli bianchi, che può.

Biomarcatori in un modello animale per Rivelare correlati neurali, ematologiche, e comportamentali di PTSD

Il video mostra una procedura passo-passo per sezionare simmetricamente un cervello umano post-mortem fisso, preparando blocchi di tessuto più piccoli per ulteriori analisi.

Sezione biemisferica simmetrica del cervello umano post-mortem

Un protocollo di estrazione proteina comune con tampone di urea / tiourea / SDS per il tessuto cerebrale umano e topi permette indentification delle proteine ​​da 2D-DIGE e la loro successiva caratterizzazione mediante mini 2DE immunoblotting. Questo metodo permette di ottenere risultati più riproducibili e affidabili da biopsie umane e modelli sperimentali.

Protein Consenso Brain-derived, estrazione protocollo per lo studio dei diritti dell&#39;uomo e murini Cervello Proteome Uso Sia 2D-DIGE e Mini 2DE Immunoblotting

procedure di taglio del cervello organizzati sono necessarie per correlare fenomeni neuropsichiatrici specifici con diagnosi neuropathologic definitive. talee cervello vengono eseguiti in modo diverso in base a varie contingenze clinico-accademico. Questo protocollo descrive una procedura simmetrica bihemispheric taglio del cervello per indagare le differenze emisferiche nelle patologie del cervello umano e per massimizzare le tecniche biomolecolari / neuroimaging attuali e future.

Simmetrica Bihemispheric Postmortem cervello taglio per studiare sano e patologico del cervello Condizioni di esseri umani

Qui, presentiamo un protocollo per congelare e sezione di tessuto cerebrale da più animali come alternativa ad alta produttività per singoli cervelli di elaborazione. Questo riduce la variabilità di colorazione durante immunohistochemistry e imaging e tempo cryosectioning.

Cryosectioning simultanea di più cervelli roditore

Questo protocollo descrive un metodo per monitorare le singole traiettorie di invecchiamento cerebrale attraverso un programma di donazione di cervello e la corretta caratterizzazione del cervello. I donatori di cervello sono coinvolti in uno studio longitudinale a lungo termine che include valutazioni multidimensionali seriali. Il protocollo contiene una descrizione dettagliata dell'elaborazione del cervello e una metodologia diagnostica accurata.

Abbiategrasso Brain Bank Protocol per la raccolta, l'elaborazione e la caratterizzazione dei cervelli di invecchiamento

Questa procedura descrive la raccolta di regioni cerebrali congelate discrete per ottenere proteine e RNA di alta qualità utilizzando strumenti economici e comunemente disponibili.

Raccolta di regioni cerebrali del roditore congelato per analisi a valle

Le biobanche sono risorse cruciali per la ricerca biomedica e l'unità Biobank for Translational and Digital Medicine presso l'Istituto europeo di oncologia è un modello in questo campo. Qui forniamo una descrizione dettagliata delle procedure operative standard delle biobanche per la gestione di diversi tipi di campioni biologici umani.

Biobanca per la medicina traslazionale: procedure operative standard per una gestione ottimale dei campioni

Questo protocollo descrive un metodo per facilitare la raccolta di campioni da campioni di prostatectomia radicale. L'obiettivo è quello di mappare, caratterizzare e sezionare con micro-macro campioni di tessuto dai campioni in base a criteri anatomopatologici prima di conservarli in una biobanca.

Miglioramento dell'affidabilità della biobanca dei tumori alla prostata con una migliore tecnica di campionamento e caratterizzazione istologica

Le neuroscienze moderne devono esplorare le differenze tra molte specie, inclusi roditori da laboratorio e umani. Tuttavia, emergono difficoltà tecniche quando sono coinvolti mammiferi con cervello grande. Questo approccio affronta la variazione interspecie delle popolazioni neuronali in mammiferi molto diversi, producendo risultati comparabili da mappare per rivelare modelli evolutivi.

Un approccio comparativo per studi quantitativi di conteggio cellulare in cervelli di mammiferi molto diversi

Scopri come preparare campioni cerebrali per il criostato e implementare un campionamento sistematico nel brain banking. Questo metodo garantisce la conservazione del materiale biologico per analisi stereologiche non distorte.

Cervello Banking: Utilizzare al meglio il vostro campioni di ricerca

Esplora altri video