Name: Registrazione elettrofisiologiche in Drosophila Embryo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: Impara a registrare l'attività elettrica di muscoli e neuroni motori in embrioni di Drosophila utilizzando tecniche di patch-clamp. Questo metodo permette di studiare la sinaptogenesi funzionale nelle giunzioni neuromuscolari glutammatergiche e nelle sinapsi centrali colinergiche e GABAergiche.

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Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Registrazione elettrofisiologica da embrioni di Drosophila richiede la manipolazione manuale e dissezione. La salute della preparazione, e la conseguente qualità delle registrazioni, dipende da un solo essere in grado di preparare rapidamente e ordinatamente i tessuti fragili embrionali per la registrazione, e quindi eseguire l&#39;esperimento. Sperimentatori dovranno essere in grado in entrambe le dissezioni embrionale e di patch clamp elettrofisiologia prima di tentare di affrontare entrambi contemporaneament...

registrazione elettrofisiologiche in drosophila embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila è un modello premier genetico per lo studio sia dello sviluppo embrionale e funzionale delle neuroscienze. Tradizionalmente, questi campi sono abbastanza isolati gli uni dagli altri, con storie in gran parte indipendenti e le comunità scientifiche. Tuttavia, l&#39;interfaccia tra questi campi di solito disparati sono i programmi di sviluppo funzionali alla base dell&#39;acquisizione di proprietà elettriche di segnalazione e la differenziazione delle sinapsi chimici funzionali durante le fasi finali della formazione circuito neurale. Questa interfaccia è un&#39;area estremamente importante per le indagini. In Drosophila, queste fasi di sviluppo funzionale si verificano durante un periodo di &lt;8 ore (a 25 ° C) durante l&#39;ultimo terzo di embriogenesi. Questo periodo tardo di sviluppo è stato a lungo considerato intrattabile a causa indagine per la deposizione di un duro, cuticola impermeabile epidermica. Un passo avanti è stato anticipato l&#39;applicazione di acqua-polimerizzazione colla chirurgica che può essere applicata a livello locale per la cuticola per permettere la dissezione controllato di fase avanzata di embrioni. Con una incisione longitudinale dorsale, l&#39;embrione può essere posato piatto, esponendo il cordone ventrale dei nervi e muscolatura della parete del corpo di indagine sperimentale. Whole-cell patch-clamp tecniche possono essere impiegate per registrare da neuroni individualmente identificabili e muscoli somatici. Queste configurazioni di registrazione sono stati utilizzati per monitorare l&#39;aspetto e la maturazione delle correnti ioniche e propagazione del potenziale d&#39;azione sia in neuroni e muscoli. Mutanti genetici che influenzano le proprietà elettriche sono stati caratterizzati per rivelare la composizione molecolare dei canali ionici e dei relativi complessi di segnalazione, e per iniziare l&#39;esplorazione dei meccanismi molecolari del differenziamento funzionale. Un focus particolare è stato l&#39;assemblaggio delle connessioni sinaptiche, sia nel sistema nervoso centrale e la periferia. Il glutamatergici giunzione neuromuscolare (NMJ) è più accessibile ad una combinazione di imaging ottico e la registrazione elettrofisiologica. Un elettrodo di vetro di aspirazione è usato per stimolare il nervo periferico, con eccitatorio giunzione corrente (EJC), le registrazioni effettuate nella tensione muscolare bloccato. Questa configurazione di registrazione è stato utilizzato per tracciare la differenziazione funzionale della sinapsi, e traccia l&#39;aspetto e la maturazione di proprietà presinaptico rilascio di glutammato. Inoltre, le proprietà postsinaptici possono essere analizzati in maniera indipendente tramite iontoforesi o applicazione di una pressione di glutammato direttamente sulla superficie del muscolo, per misurare la comparsa e la maturazione dei campi recettori del glutammato. Così, sia gli elementi pre-e post-sinaptici possono essere monitorate separatamente o in combinazione durante la sinaptogenesi embrionale. Questo sistema è stato molto utilizzato per isolare e caratterizzare mutanti genetici che impedire la formazione embrionale sinapsi, e quindi svelare i meccanismi molecolari che regolano la specificazione e differenziazione delle connessioni di sinapsi e funzionali, le proprietà di segnalazione sinaptica.

Le registrazioni elettrofisiologiche da<em&gt; Drosophila</em&gt; Embrioni consentire analisi di sviluppo muscolare e le proprietà elettriche dei neuroni, così come la caratterizzazione di sinaptogenesi funzionali a livello della giunzione neuromuscolare glutammatergica e centrale colinergici e GABAergici sinapsi.

Registrazione elettrofisiologiche in Drosophila Embryo

Drosophila è un modello genetico di primo piano per lo studio sia dello sviluppo embrionale che delle neuroscienze funzionali. Tradizionalmente, questi campi sono piuttosto...

Registrazioni elettrofisiologiche da muscoli e neuroni motori possono essere ottenute dalla parete corporea di un embrione di oph adeguatamente preparato. I muscoli 6, 7, 12 o 13 possono essere facilmente registrati mediante la configurazione di registrazione in intera cellula e correnti di ampiezza miniatuta robuste possono essere misurate dopo aver ottenuto un sigillo gigaohm per registrare dalla giunzione neuromuscolare. Un elettrodo a sifone può essere utilizzato per aspirare un nervo motore in prossimità del punto di uscita dal sistema nervoso centrale e fornire una stimolazione pre-sinaptica mentre le correnti in intera cellula vengono misurate nel muscolo post-sinaptico.In alternativa, una pipetta può essere utilizzata per somministrare neurotrasmettitori eccitatori vicino all'elettrodo di registrazione mediante iontoforesi o espulsione a pressione. Ciao, sono Ton del Laboratorio di Dave del Dipartimento di Scienze Biologiche dell'Università dell'Illinois a Chicago. Oggi vi mostrerò come registrare fisiologicamente lo stadio embrionale della giunzione neuro-muscolare e dei neuroni centrali.Queste procedure vengono utilizzate per studiare la funzione e lo sviluppo del sistema

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Biologia

Questo video mostra la procedura per isolare il cervello tutto da adulto Drosophila, in preparazione per la registrazione di singoli neuroni utilizzando tecnologia standard a cellula intera. Esso comprende le immagini di cellule GFP etichettati e neuroni visualizzati durante la registrazione.

Registrazioni cella intero cervello di adulti Drosophila

Qui si descrivono i metodi elettrofisiologici per la misurazione della trasmissione sinaptica a livello della giunzione neuromuscolare larva di Drosophila. Rilascio evocato è iniziata artificialmente stimolando gli assoni dei motoneuroni, e la trasmissione attraverso il NMJ può essere misurata la risposta postsinaptica evocata nel muscolo.

Metodi elettrofisiologici per la registrazione Potenziali Synaptic dal NMJ Larve di Drosophila

Questa tecnica espone il neuromusculature Drosophila embrionali per immunoistochimica o registrazione elettrofisiologica. E 'utile per studiare eventi precoci nello sviluppo neuromuscolare o l'esecuzione di elettrofisiologia in mutanti che non possono schiudersi.

Raccolta e Preparazione Drosophila Gli embrioni per la registrazione elettrofisiologici e altre procedure

Vi presentiamo vari modi per monitorare la funzione cardiaca in larva...

Il monitoraggio delle funzioni cardiaca in larvali Drosophila melanogaster Per gli Studi fisiologici

Il sistema di fibra Gigante è un semplice circuito neuronale di...

Le registrazioni elettrofisiologiche dal Percorso di Fiber Gigante D. melanogaster</em

Questo video delinea il protocollo per la registrazione elettrofisiologica dell'attività dei fotorecettori nell'occhio di una Drosophila immobilizzata, consentendo una misurazione precisa delle variazioni di tensione in risposta agli stimoli luminosi.

Registrazione elettrofisiologica delle risposte di tensione dei fotorecettori retinici di Drosophila agli stimoli luminosi

Il video dimostra la registrazione extracellulare dell'attività neuronale dal sistema nervoso centrale (SNC) delle larve di Drosophila. Il SNC sezionato viene posizionato in una camera di registrazione e l'attività elettrica di un nervo discendente viene registrata per stabilire la frequenza di attivazione di base. Viene quindi introdotto un agente di prova e viene registrata la variazione della frequenza di attivazione per determinare l'effetto eccitatorio o inibitorio dell'agente.

Registrazione extracellulare dell'attività elettrica nel sistema nervoso centrale della Drosophila

Questo protocollo descrive registrazione extracellulare delle possibili azioni di risposta sparati dai neuroni del gusto labellar in Drosophila.

Elettrofisiologici Registrazione da<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Taste Sensilla

I microelettrodi affilati consentono un'accurata caratterizzazione elettrofisiologica dell'output dei fotorecettori e degli interneuroni visivi in Drosophila vivente. Qui mostriamo come utilizzare questo metodo per registrare risposte di tensione di alta qualità delle singole cellule alla stimolazione luminosa controllata. Questo metodo è ideale per studiare l'elaborazione delle informazioni neurali negli occhi composti da insetti.

Metodo elettrofisiologiche per la registrazione intracellulare di tensione Risposte di<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorecettori e Interneuroni a luce stimoli<em&gt; In Vivo</em

Le registrazioni a cellule intere dai fotoricettori Drosophila melanogaster consentono di misurare scatti oscuri spontanei, urti quantici, risposte macroscopiche alla luce e relazioni di tensione-corrente in varie condizioni. In combinazione con gli strumenti di manipolazione genetica D. melanogaster , questo metodo consente di studiare il percorso iniettol-lipidico onnipresente e il suo target, il canale TRP.

Metodo elettrofisiologico per le registrazioni a morsetto di tensione a cellule intere da<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorecettori

Questo protocollo descrive un metodo per registrare l'attività elettrica discendente del sistema nervoso centrale Drosophila melanogaster per abilitare il costo-efficiente e conveniente test degli agenti farmacologici, mutazioni genetiche delle proteine neuronali, e/o il ruolo di inesplorate vie fisiologiche.

Registrazione elettrofisiologica dell'attività del sistema nervoso centrale di terza-Instar Drosophila Melanogaster

Impara a registrare l'attività elettrica di muscoli e neuroni motori in embrioni di Drosophila utilizzando tecniche di patch-clamp. Questo metodo permette di studiare la sinaptogenesi funzionale nelle giunzioni neuromuscolari glutammatergiche e nelle sinapsi centrali colinergiche e GABAergiche.

Registrazione elettrofisiologiche in Drosophila Embryo

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