La sonda Microfluidic: funzionamento e utilizzo per l'elaborazione delle superfici localizzate

Questa procedura mostra come assemblare e utilizzare la sonda microfluidica o l'MFP. I componenti microfluidici dell'MFP sono siringhe a tenuta di gas, tubi capillari in vetro, connettori micro a tenuta di Upchurch e la testa MFP. Questo video presenterà le fasi critiche dell'assemblaggio e dell'allineamento.

Una volta assemblata, la stampante multifunzione può essere utilizzata con un'ampia varietà di substrati e reagenti per la modellazione e la lavorazione delle superfici. Ciao, sono Cecil Perot. Sono un borsista post-dottorato nel laboratorio di David Yaker presso il Dipartimento di Ingegneria Biomedica della McGill University di Montreal, in Canada.

Ciao, sono Mohammad Kasime. Sono un dottorando presso il laboratorio di David Y presso il dipartimento di ingegneria biomedica della McGill University. Ciao, sono David Yoker.

Sono un ricercatore presso il Dipartimento di Ingegneria Biomedica e vorrei darvi il benvenuto oggi alla nostra dimostrazione sulla sonda microfluidica. Oggi vi mostreremo una procedura di funzionamento e utilizzo della sonda microfluidica. Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per la lavorazione e la modellazione delle superfici.

Quindi iniziamo Per avviare questo protocollo. Siringhe e aghi di plastica vengono utilizzati per riempire le siringhe di vetro di tipo gas con reagenti, assicurando che non siano presenti bolle d'aria. In genere, utilizziamo una siringa da uno a 10 microlitri per l'iniezione e una siringa con un volume da cinque a 10 volte maggiore per l'aspirazione.

Successivamente, utilizzando raccordi nano a tenuta stagna con basso volume morto, le siringhe vengono collegate al tubo capillare. I capillari vengono quindi riempiti e controllati al microscopio per la presenza di bolle. Il chip MFP è preriempito con una soluzione tampone per evitare l'intrappolamento di bolle durante il collegamento dei capillari.

Infine, i capillari vengono inseriti nel pezzo di connessione PDMS nella testa del puntello microfabbricata. Con l'MFP ora assemblato, siamo pronti per iniziare a configurarlo. Il substrato viene inserito in un supporto fatto in casa.

C'è fissato al tavolino del microscopio. Lo spazio tra l'MFP e il substrato è fondamentale per i processi di modellazione delle superfici. Utilizzando un supporto a tre punti formato da viti micrometriche, l'allineamento orizzontale viene regolato con precisione micrometrica.

Ciò è necessario perché il substrato viene elaborato mediante scansione al di sotto dell'MFP. Per iniziare la configurazione dell'MFP, la testa della sonda viene bloccata nel supporto della sonda e montata sulla stazione della sonda sopra un microscopio invertito. Le siringhe vengono quindi inserite in pompe a siringa ad alta precisione.

Successivamente, utilizzando una coppia di goniometri, l'allineamento della meza dell'MFP con il substrato viene regolato osservando gli anelli di Newton, noti anche come frange di interferenza. Questi compaiono quando l'MFP viene portato a contatto con il substrato, il punto di contatto e la frequenza degli anelli servono come indicazione dell'inclinazione. Quando l'MFP è allineato con la superficie, un singolo anello di interferenza si estende su tutta la superficie.

Questa misura serve anche a calibrare la separazione tra l'MFP e il substrato. Una volta configurata la stampante multifunzione, siamo ora pronti per passare al funzionamento della stampante multifunzione. Durante il funzionamento dell'MFP, l'erogazione è controllata dal software di visualizzazione del laboratorio.

Il funzionamento del dispositivo viene visualizzato a occhio e con una telecamera CCD. Prima di iniziare una corretta aspirazione, iniettare del liquido per assicurarsi che la siringa di aspirazione sia orientata correttamente e che non vi siano bolle. L'MFP viene quindi immerso nel buffer.

Ora possiamo iniziare l'iniezione di liquido monitorando il confinamento delle perle in volo. Il rapporto di aspirazione dell'iniezione varia da uno a tre a uno a 10, a seconda della diffusività del reagente con un tampone circostante e del modello di flusso geometrico desiderato. Infine, la sonda può ora essere utilizzata per una varietà di applicazioni.

I modelli di superficie mostrati qui sono stati ottenuti dalla MFP con biotina marcata con fluoresceina su vetrini in vetro idrogel rivestiti con ENC e strep divide. La portata di iniezione era di un nanolitro al secondo e la portata di aspirazione era di 10 nanolitri al secondo utilizzando siringhe da 10 microlitri e 50 microlitri rispettivamente. Lo spazio tra la superficie e la sonda era di cinque micrometri.

L'MFP può essere utilizzato anche per la colorazione locale e l'elaborazione di cellule e tessuti. Il confinamento del flusso impedisce la diffusione del reagente e consente una precisa colorazione chimica delle cellule. Come mostrato qui, un monostrato di cellule di fibroblasti è stato colorato con 100 microgrammi per millilitro di dai.

Per questo motivo vi abbiamo mostrato come utilizzare la sonda microfluidica. Quando si esegue questa procedura, è necessario assicurarsi di evitare bolle sul sistema e assicurarsi che la superficie microfluidica del puntello sia parallela al substrato. Quindi questo è tutto.

Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.