Name: Cultura di cellule precursori staminali neurali del mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: Impara a isolare e coltivare neuroprecursori dalla corteccia cerebrale di embrioni di topo. Questo metodo riproducibile utilizza laminina per l'adesione cellulare e supporta studi di neuroscienza e biologia dello sviluppo.

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<ol><li> Precursori del mouse neurali (NPC) sono stati isolati da E12.5 corteccia embrionale. </li><li> Strati della pelle e mesenchimali sono state rimosse dalla sezionati vescicole telencefaliche. </li><li> Le vescicole sono state incubate a 0,05% di tripsina con EDTA 0,02% e lo 0,2% di BSA in HBSS per 20 minuti a 37 ° C. </li><li> Tripsinizzazione è stato fermato da un uguale volume di 1 inibitore della soia mg / ml di tripsina (Sigma # T6522) a HBSS. </li><li> Tessuto digerisce erano dissociate utilizzando varie tornate di triturazione con il fuoco lucidato pipette Pasteur. </li><li> Le cellule sono state lavate una volta con 0,2% di BSA in HBSS e placcato a 50.000 cellule / ml su laminina rivestite coprioggetto in media con 20 ng / ml di EGF, 10 ng / ml FGF2 (R &amp; D Systems o Peprotech), e 2 ug / eparina ml ( Sigma). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

Grandi progressi nella nostra comprensione dello sviluppo del SNC e biologia delle cellule staminali è stato reso possibile dalla nostra capacità di raccogliere, isolare e cultura cellule embrionali staminali neurali. Questo video dimostra la dissezione di E12.5 il mouse corteccia cerebrale e la conseguente disgregazione e la coltura di cellule embrionali staminali neurali. Molti altri metodi simili sono stati impiegati con successo da altri ricercatori.

<table><tbody><tr><td>Forbici dritte per iris</td><td>Strumento</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Forbici medie</td><td>Strumento</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Forbici micro</td><td>Strumento</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinze ricurve</td><td>Strumento</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

cultura di cellule precursori staminali neurali del mouse

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Primaria colture di cellule staminali neurali sono utili per studiare i meccanismi alla base dello sviluppo del sistema nervoso centrale. Ricerca sulle cellule staminali aumenteranno la nostra comprensione del sistema nervoso e può consentire di sviluppare terapie per malattie attualmente incurabili cerebrali e lesioni. Inoltre, le cellule staminali devono essere utilizzati per la ricerca sulle cellule staminali finalizzate allo studio dettagliato dei meccanismi di differenziamento neurale e transdifferenziazione ed i segnali genetici ed ambientali che dirigono la specializzazione delle cellule in particolari tipi di cellule. Questo video mostra una tecnica utilizzata per disaggregare le cellule embrionali giorni dal 12,5 proencefalo del mouse dorsale. La procedura di dissezione comprende la raccolta E12.5 embrioni di topo dall&#39;utero, eliminando la &quot;pelle&quot; con sottile dissettore e infine isolare pezzi di corteccia cerebrale. Dopo la dissezione, il tessuto viene digerito e meccanicamente dissociato. Le cellule risospese dissociate vengono poi coltivate in &quot;cellule staminali&quot; media che favorisce la crescita delle cellule staminali neurali.

Questo video descrive il metodo utilizzato per l&#39;isolamento di neuroprecursors dalla corteccia sviluppo embrionale dei topi. Il procedimento per eliminare gli embrioni dall&#39;utero, sezionare il tessuto corticale, e digerire la corteccia cerebrale isolato viene mostrato.

Cultura di cellule precursori staminali neurali del mouse

Le colture primarie di cellule staminali neurali sono utili per studiare i meccanismi alla base dello sviluppo del sistema nervoso centrale. La ricerca sulle cellule staminali aumenterà...

Questo è quindi il primo passaggio nell'isolamento, dissociazione e coltura delle cellule precursori neurali. Per prima cosa, provvederò a rivestire una piastra a 24 pozzetti. Non è trattata per la coltura dei tessuti.Lo rivestirò con laminina in modo che le cellule aderiscano. Quindi, per prima cosa lo rivestirò con una miscela di acqua e poli-D-lisina. Aggiungerò circa 450 microlitri per pozzetto.Quindi, ho appena rivestito metà della piastra, queste due file qui, con la soluzione di poli-D-lisina. E la lascerò in incubazione per cinque minuti a temperatura ambiente, sempre all'interno della cappa. È rimasta in incubazione per cinque minuti.Sto per rimuovere la soluzione di PDL utilizzando il vuoto qui. Azione della pompa a vuoto. Ora risciacquerò nuovamente le pozzette con acqua, circa 450 microlitri.Assolutamente nessun tempo di incubazione per il risciacquo con acqua. Procederò semplicemente ad aspirare l'acqua. Ora aggiungerò la soluzione per la laminazione.Il laminato viene sciolto nel mezzo EM a due microgrammi per millilitro. Aggiungerò quindi 450 microlitri della soluzione di laminato a ciascun campione; al momento sto ricoprendo la plastica. In alternativa, si possono ri

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Biologia

Qui mostriamo il nostro metodo per isolare il mouse epidermiche cresta neurale delle cellule staminali (EPI-NCSC). Tecnica prevede micro-dissezione follicoli baffi, isolando il rigonfiamento e placeing in colture di tessuti. EPI-NCSC iniziano a emigrare da espianti rigonfiamento sul substrato entro 3 - 4 giorni.

Topo Epidermal cresta neurale delle cellule staminali (EPI-NCSC) Culture

Questo protocollo video mostra l'applicazione del test neurosfere per l'isolamento e l'espansione delle cellule staminali neurali da eminenze gangliari del giorno embrionale 14-topo cervello.

Stabilire embrionali di topo Neural Stem Cell Culture del saggio di neurosfere

Isolamento di embrionale cresta neurale dal tubo neurale facilita l'uso...

Isolamento e la coltura delle cellule della cresta neurale da Embryonic Murine tubo neurale

Questo video mostra un protocollo dettagliato per isolare le pareti del ventricolo laterale dal cervello del topo adulto ed eseguire la dissociazione enzimatica del tessuto per ottenere singole cellule. Queste cellule sono poi sottoposte a specifiche condizioni di coltura che aumentano selettivamente la proliferazione delle cellule staminali neurali e ne promuovono la differenziazione in co-colture di oligodendrociti e astrociti.

Ottenimento di una coltura mista di oligodendrociti e astrociti da cellule staminali neurali di topo adulto

Questo video dimostra un metodo per la generazione in vitro di cellule progenitrici neurali (NPC) da cellule staminali embrionali di topo (mESC). Le mESC vengono coltivate in sospensione per formare corpi embrioidi (EB), che vengono poi guidati a differenziarsi in NPC tramite trattamento con acido retinoico in una coltura aderente.

Una tecnica per generare cellule progenitrici neurali da cellule staminali embrionali di topo

Qui si descrive un protocollo dettagliato per la generazione simultanea di colture di cellule precursore neuronali, sia come monostrati aderenti o neurosfere, dalla zona subventricolare e giro dentato di singoli topi adulti.

Un mouse, due culture: isolamento e la coltura di Adult Neural Stem Cells dalle due zone neurogena Mice individuale

Questo protocollo descrive in dettaglio il metodo per generare progenitori neurali da cellule staminali embrionali utilizzando un metodo monostrato privo di siero. Questi progenitori possono essere utilizzati per derivare tipi di cellule neurali mature o per studiare il processo di specificazione neurale e sono suscettibili di ridimensionamento in formato multipozzetto per lo screening dei composti.

Differenziamento neurale delle cellule staminali embrionali di topo in siero privo monostrato Cultura

Stabilire sistemi di coltura per l'espansione delle cellule staminali neurali adulte (aNSC) consente l'esame e l'applicazione di aNSC per la terapia. La zona sottocallosa (SCZ) è stata recentemente riconosciuta come una nuova regione che forma neuroblasti nei topi adulti. Qui vengono descritti i metodi per l'isolamento, l'espansione e la differenziazione delle SCZ-aNSC.

Isolamento e la coltura di adulti neurali cellule staminali dal Subcallosal Zona mouse

Qui, presentiamo una nuova tecnica microsurgical per l'isolamento delle cellule staminali neurali dall'eminenza E13 del mouse embrione gangliare.

Isolamento e coltura di cellule staminali neurali embrionali del Mouse

Descriviamo la procedura per la differenziazione in vitro di cellule staminali embrionali di topo in cellule neuronali utilizzando il metodo della goccia sospesa. Inoltre, eseguiamo un'analisi fenotipica completa attraverso RT-qPCR, immunofluorescenza, RNA-seq e citometria a flusso.

Differenziazione e caratterizzazione di progenitori neurali e neuroni da cellule staminali embrionali di topo

Impara a isolare e coltivare neuroprecursori dalla corteccia cerebrale di embrioni di topo. Questo metodo riproducibile utilizza laminina per l'adesione cellulare e supporta studi di neuroscienza e biologia dello sviluppo.

Cultura di cellule precursori staminali neurali del mouse

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