Name: Dissezione di giro dentato ippocampale di topo adulto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-17T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Impara la dissezione del giro dentato ippocampale di topo adulto utilizzando uno stereomicroscopio. Questa tecnica consente di ottenere campioni intatti per analisi trascrizomiche e proteomiche.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ringraziamo il Dott. Yoko Nabeshima dell&#39;Università di Kyoto per il suo insegnamento sulla tecnica di dissezione e la signora Aki Miyakawa a Fujita University Health per il suo sostegno al cinema. Questo lavoro è stato sostenuto dal Programma per la promozione di studi fondamentali in Scienze della Salute dell &#39;Istituto Nazionale per l&#39;Innovazione Biomedica, una sovvenzione in aiuti per la ricerca scientifica sulle Settori prioritari-Integrativa Brain Research (Shien) - da MEXT in Giappone, e da una borsa-in-Aid dal CREST di Scienze Giappone e Agenzia Technology.

Dissezione di giro dentato dell&#39;ippocampo <ol><li> In un mouse profondamente anestetizzati, accuratamente sezionare il cervello fuori dal cranio e il luogo in ghiacciata tampone fosfato salino (PBS). </li><li> In una capsula di Petri contenente ghiaccio PBS freddo, tagliare il cervello lungo la fessura longitudinale del cervello utilizzando un bisturi, e tagliare le regioni posteriori a lambda (mesencefalo, romboencefalo, e cervelletto). </li><li> Posizionare il lato mediale dell&#39;emisfero cerebrale e, con cautela il numero del diencefalo (talamo e ipotalamo) al microscopio di dissezione. Questo esporre il lato mediale dell&#39;ippocampo, consentendo la visualizzazione del giro dentato. Il giro dentato è distinguibile dal corno di Ammone da parte del gap tra di loro. Lesioni all&#39;ippocampo o nell&#39;area circostante renderà più difficile isolare il giro dentato. </li><li> Inserire un forte ago-punta (ad esempio, 27-gauge) in ogni lato del giro dentato (confini del giro dentato e corno di Ammon; Figura 1), e far scorrere gli aghi superficialmente lungo il setto-temporale asse di ippocampo di isolare il giro dentato. </li><li> Sollevare il giro dentato isolato usando un ago o pinze e collocarlo in una provetta. Il così-dentato ottenuto campione di tessuto giro può essere utilizzato immediatamente per qualsiasi saggio o conservati in un congelatore per un uso successivo. </li><li> Isolare il giro dentato dall&#39;altro emisfero cerebrale utilizzando lo stesso metodo. </li></ol> Quantitativa real-time PCR Il giro dentato è stato isolato utilizzando il metodo sopra menzionato e l&#39;ippocampo rimanente è stato sezionato come esempio il corno di Ammone da topi wild-type. PCR in tempo reale di beta-actina, TDO2, DSP, Mrg1b e Tyro3 sono stati eseguiti con il giro dentato e campioni di corno di Ammon come descritto in precedenza 1. Primer 5&#39;-CTGGCGAGATCACGATGACG e 5&#39;-AAGCTACGCTGTTGTCTAACC sono stati utilizzati per Mrg1b e GCCTCCAAATTGCCCGTCA e 5&#39;-CCAGCACTGGTACATGAGATCA per Tyro3. Microarray analisi Esperimenti di microarray sono stati effettuati con maschi topi wild-type e topi eterozigoti per l&#39;alfa-isoforma di calcio / calmodulina-dipendente delle proteine ​​chinasi II (alpha-CaMKII + / - topi) come descritto in precedenza 1. In breve, l&#39;RNA isolato da tutto l&#39;ippocampo o giro dentato di topi wild-type e mutante è stato ibridato con un mouse Genome Array 430 2.0 (Affymetrix, Santa Clara, CA), e ogni GeneChip è stato analizzato da un Affymetrix GeneChip scanner 3000 (GCS3000) . GeneChip analisi è stata eseguita con Microarray Analysis Suite versione 5.0.

<ol><li>Yamasaki, N., Maekawa, M., Kobayashi, K., Kajii, Y., Maeda, J., Soma, M., Takao, K., Tanda, K., Ohira, K., Toyama, K., Kanzaki, K., Fukunaga, K., Sudo, Y., Ichinose, H., Ikeda, M., Iwata, N., Ozaki, N., Suzuki, H., Higuchi, M., Suhara, T., Yuasa, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-CaMKII+deficiency+causes+immature+dentate+gyrus%2C+a+novel+candidate+endophenotype+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-CaMKII deficiency causes immature dentate gyrus, a novel candidate endophenotype of psychiatric disorders.</a> Mol. Brain. 1, 6-6 (2008).</li>
<li>Insausti, A. M., Megias, M., Crespo, D., Cruz-Orive, L. M., Dierssen, M., Vallina, I. F., Insausti, R., Florez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+volume+and+neuronal+number+in+Ts65Dn+mice%3A+a+murine+model+of+Down+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Hippocampal volume and neuronal number in Ts65Dn mice: a murine model of Down syndrome.</a> Neurosci. Lett. 253, 175-175 (1998).</li>
<li>Redwine, J. M., Kosofsky, B., Jacobs, R. E., Games, D., Reilly, J. F., Morrison, J. H., Young, W. G., Bloom, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentate+gyrus+volume+is+reduced+before+onset+of+plaque+formation+in+PDAPP+mice%3A+a+magnetic+resonance+microscopy+and+stereologic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dentate gyrus volume is reduced before onset of plaque formation in PDAPP mice: a magnetic resonance microscopy and stereologic analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 1381-1381 (2003).</li>
<li>Lein, E. S., Zhao, X., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+a+molecular+atlas+of+the+hippocampus+using+DNA+microarrays+and+high-throughput+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Defining a molecular atlas of the hippocampus using DNA microarrays and high-throughput in situ hybridization.</a> J. Neurosci. 24, 3879-3879 (2004).</li>
<li>Matsuo, N., Yamasaki, N., Ohira, K., Takao, K., Toyama, K., Eguchi, M., Yamaguchi, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+changes+underlying+the+working+memory+deficit+in+alpha-CaMKII+heterozygous+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural activity changes underlying the working memory deficit in alpha-CaMKII heterozygous knockout mice.</a> Front. Behav. Neurosci. 3, 20-20 (2009).</li>
<li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc.. San Diego. (1997).</li>
</ol>

Gli esperimenti su animali sono stati eseguiti in conformità con il National Institute of Health Guide di cura e dell&#39;uso degli animali da laboratorio, e approvato dal comitato di cura degli animali e l&#39;uso di Fujita University Health.

Il giro dentato occupa circa il 25% al 30% del volume della formazione dell&#39;ippocampo 2,3. Ha una composizione unica delle cellule e svolge un ruolo fondamentale nelle funzioni cerebrali diverse. Pertanto, le tecniche per isolare il giro dentato sono utili per analizzare gli eventi che si verificano in particolare in questa regione. Qui, abbiamo dimostrato una procedura per sezionare in modo efficiente il giro dentato dell&#39;ippocampo di topo adulto e ha confermato la precisione della tecnica. In primo luogo, lo studio istologico ha rivelato che il giro dentato era separato senza contaminazione da altre regioni (Figura 1), che indica che un campione puro giro dentato possono essere preparati. In secondo luogo, abbiamo confermato che il tessuto è sezionato giro dentato conducendo real-time PCR del giro dentato geni specifici, TDO2 e DSP, e corno di Ammon geni arricchito, Mrg1b e Tyro3 4 (Figura 2). Le espressioni mRNA di TDO2 (p = 0,000023; n E = 4 e 4, rispettivamente) e DSP (p = 0,0000030, n E = 4 e 4, rispettivamente) nei campioni giro dentato Sono state rinvenute, ovviamente, più elevati, mentre Mrg1b (p = 0.000080, n E = 4 e 4, rispettivamente) e Tyro3 (p = 0,00017, n E = 4 e 4, rispettivamente) sono stati più bassi, rispetto a quelli nei campioni corno di Ammon. Beta-actina livelli di espressione non differivano in questi campioni (p = 0,11, n E = 4 e 4, rispettivamente). Così, abbiamo potuto verificare se il giro dentato è stato accuratamente sezionato da condurre tale semplici esperimenti in tempo reale PCR. In terzo luogo, per valutare l&#39;utilità di questo metodo di dissezione, abbiamo confrontato il livello di espressione di mRNA di ippocampo tutto con quella del giro dentato. Ippocampo intero e giro dentato ottenuto da wild-type (n = 9 e 4, rispettivamente) e alfa-CaMKII + / - topi (n è = 18 e 4, rispettivamente) sono stati processati per l&#39;analisi microarray, e per tutti i geni segnato, la piega- cambiamento è stato calcolato dividendo il valore mutante dalla wild-type di valore. I risultati hanno indicato che i cambiamenti di espressione dell&#39;mRNA, in particolare di giro dentato specifiche molecole come DSP e TDO2, sono stati rilevati fino ad un aumento di 5 volte nella sensibilità nei campioni giro dentato rispetto ai campioni di tutto dell&#39;ippocampo (Tabella 1). Abbiamo precedentemente dimostrato che l&#39;alfa-CaMKII + / - topi mostrano comportamenti relativi alla umano disturbi psichiatrici come deficit di memoria di lavoro e un ritmo esagerato infradiani 1,5. Inoltre, le caratteristiche morfologiche ed elettrofisiologiche dei neuroni nel giro dentato topi mutanti sono sorprendentemente simili a quelle di neuroni immaturi giro dentato nei roditori normali, indicando che i neuroni di questi topi mutanti non riescono a svilupparsi fino alla scadenza 1. L&#39;immaturo espressione dentato giro e down-regolato di Dsp e TDO2 mRNA in alpha-CaMKII + / - i topi sono in linea con la constatazione che Dsp e TDO2 possono essere utilizzati come marcatori delle cellule dei granuli maturi nel giro dentato (Ohira et al, non pubblicata. dati). Nel loro insieme, questa tecnica dissezione comodo e preciso in modo attendibile utilizzato per studi si sono concentrati sul giro dentato. Tessuto giro dentato ottenuto con questo metodo è applicabile ad altri tipi di analisi pure, comprese le analisi proteomica e di biologia cellulare. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig1.jpg" alt="figura 1" /> Figura 1. Verifica del giro dentato isolati dallo studio istologico. Una sezione coronale del cervello dopo aver isolato giro dentato è stato elaborato per la colorazione di Nissl (riquadro a sinistra), e un diagramma schematico tratto dal cervello di topo atlas6 rappresenta circa lo stesso livello della sezione mostrata nel pannello di sinistra (pannello di destra). Le frecce indicano le direzioni dell&#39;ago punta di inserimento. Scala grafica, 1 mm. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig2.jpg" alt="figura 2" /> Figura 2. Verifica del giro dentato isolata dal real-time PCR. Il giro dentato e il corno di Ammone s ottenuto da quattro topi wild-type sono stati trattati per PCR in tempo reale di beta-actina, TDO2, DSP, Mrg1b e Tyro3. I risultati sono presentati come media ± SEM. Per l&#39;analisi statistica, test t di Student s è stato impiegato, e valori di p sono seguiti: beta-actina, p = 0,11; TDO2, p = 0,000023 (** 1); Dsp, p = 0,0000030 (** 2); Mrg1b, p = 0.000080 (** 3), e Tyro3, ​​p = 0,00017 (** 4). Tabella 1. . Analisi microarray di dell&#39;ippocampo tutto e giro dentato geni differenzialmente espressi nel giro dentato dell&#39;ippocampo e tutta l&#39;alpha-CaMKII + / - i topi sono stati determinati calcolando il fold-change da quello rilevato in topi wild-type. I dati sono stati analizzati per la significatività statistica utilizzando il test t di Student s tra wild-type e alfa-CaMKII + / - topi. Tra i geni la cui espressione esposti p &lt;0,05 inil giro dentato di alpha-CaMKII + / - topi rispetto a quella di topi wild-type, i primi 50 geni sono elencati. Si noti che il numero di campioni per giro dentato sono molto meno di quelli per intero ippocampo. AffyID, Affymetrix sonda identificatore; CKII, alpha-CaMKII + / - topi; WT, topi wild-type. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Giro dentato (p &lt;0,05) WT: n = 4, CKII + / -: n = 4 </td><td></td><td colspan="2"> Ippocampo tutto WT: n = 9, CKII + / -: n = 18 </td></tr><tr><td> Gene Titolo </td><td> Alle banche di geni </td><td> AffyID </td><td></td><td> Fold change </td><td> valore di p </td><td></td><td> Fold change </td><td> valore di p </td></tr><tr><td> desmoplakina </td><td> AV297961 </td><td> 1435494_s_at </td><td></td><td> 0,011018913 </td><td> 7.02694E-06 </td><td></td><td> 0,037021003 </td><td> 1.86126E-13 </td></tr><tr><td> desmoplakina </td><td> AV297961 </td><td> 1435493_at </td><td></td><td> 0,014369734 </td><td> 7.86747E-06 </td><td></td><td> 0.04232106 </td><td> 1.00579E-12 </td></tr><tr><td> triptofano 2,3-diossigenasi </td><td> AI098840 </td><td> 1419093_at </td><td></td><td> 0,020986484 </td><td> 5.23546E-09 </td><td></td><td> 0,101037776 </td><td> 4.14823E-13 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452106_at </td><td></td><td> 0,075479901 </td><td> 1.05191E-08 </td><td></td><td> 0,234001154 </td><td> 1.66301E-15 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452107_s_at </td><td></td><td> 0,079457767 </td><td> 1.40433E-07 </td><td></td><td> 0,177974715 </td><td> 3.9758E-12 </td></tr><tr><td> tireotropina rilasciando recettore ormonale </td><td> M59811 </td><td> 1449571_at </td><td></td><td> 0,103105815 </td><td> 0,003093796 </td><td></td><td> 0,801412732 </td><td> 0,283994361 </td></tr><tr><td> recettore della rianodina 1, del muscolo scheletrico </td><td> X83932 </td><td> 1427306_at </td><td></td><td> 0,104825517 </td><td> 3.38513E-07 </td><td></td><td> 0,650685017 </td><td> 0,000308462 </td></tr><tr><td> ignorante anello elica elica 1 </td><td> NM_010916 </td><td> 1419533_at </td><td></td><td> 9.431896 </td><td> 6.7979E-06 </td><td></td><td> 4,078815314 </td><td> 5.27E-11 </td></tr><tr><td> copine familiare IX </td><td> BB274531 </td><td> 1454653_at </td><td></td><td> 9.159157 </td><td> 7.99492E-06 </td><td></td><td> 1,797304153 </td><td> 0,000296375 </td></tr><tr><td> doublecortin-like chinasi 3 </td><td> BB326709 </td><td> 1436532_at </td><td></td><td> 0,109336662 </td><td> 1.95278E-07 </td><td></td><td> 0.56697229 </td><td> 2.62633E-08 </td></tr><tr><td> calpaina 3 </td><td> AF127766 </td><td> 1426043_a_at </td><td></td><td> 0,111269769 </td><td> 8.07053E-06 </td><td></td><td> 0,370956608 </td><td> 2.04421E-14 </td></tr><tr><td> Adulti di sesso maschile corpo striato cDNA, RIKEN full-length arricchito biblioteca, clone: ​​C030023B07 prodotto: inclassificabile, inserire la sequenza completa </td><td> BB357628 </td><td> 1460043_at </td><td></td><td> 0,118712341 </td><td> 6.16926E-07 </td><td></td><td> 0,682339204 </td><td> 2.33001E-06 </td></tr><tr><td> collagene e calcio vincolante FEG settori 1 </td><td> AV264768 </td><td> 1437385_at </td><td></td><td> 0,124043978 </td><td> 3.65669E-05 </td><td></td><td> 0,488394112 </td><td> 4.05538E-06 </td></tr><tr><td> precursore della proteina beta amiloide vincolante, la famiglia A, membro 2 legame con le proteine ​​(A4) </td><td> AK013520 </td><td> 1431946_a_at </td><td></td><td> 7.7986307 </td><td> 1.2098E-06 </td><td></td><td> 2,099164713 </td><td> 1.67047E-06 </td></tr><tr><td> calbindin-28K </td><td> BB177770 </td><td> 1456934_at </td><td></td><td> 0,130255444 </td><td> 3.32186E-06 </td><td></td><td> 0,572605751 </td><td> 1.99157E-10 </td></tr><tr><td> Locus trascritto </td><td> AV328597 </td><td> 1443322_at </td><td></td><td> 0,133290835 </td><td> 5.43583E-06 </td><td></td><td> 0,562767164 </td><td> 7.56544E-06 </td></tr><tr><td> neuropeptide Y recettori Y2 </td><td> NM_008731 </td><td> 1417489_at </td><td></td><td> 0,135319609 </td><td> 0,000113407 </td><td></td><td> 0,781498474 </td><td> 0.00394504 </td></tr><tr><td> ras proteine ​​elemento reattivo legame 1 </td><td> BE197381 </td><td> 1428657_at </td><td></td><td> 0,138235114 </td><td> 7.93691E-07 </td><td></td><td> 0,651220705 </td><td> 2.94209E-05 </td></tr><tr><td> linea cellulare gliale neurotrofico derivato della famiglia dei recettori fattore alpha 2 </td><td> BB284482 </td><td> 1433716_x_at </td><td></td><td> 0,139062563 </td><td> 2.35371E-06 </td><td></td><td> 0,669544709 </td><td> 0,000214146 </td></tr><tr><td> preproenkephalin 1 </td><td> M13227 </td><td> 1427038_at </td><td></td><td> 6.9850435 </td><td> 2.39074E-08 </td><td></td><td> 1,766018828 </td><td> 0,000250501 </td></tr><tr><td> RIKEN gene cDNA 1810010H24 </td><td> BI729991 </td><td> 1428809_at </td><td></td><td> 6.8658915 </td><td> 1.88516E-05 </td><td></td><td> 2.77573142 </td><td> 6.81865E-09 </td></tr><tr><td> recettore della rianodina 1, del muscolo scheletrico </td><td> BG793713 </td><td> 1457347_at </td><td></td><td> 0,151364292 </td><td> 3.35612E-05 </td><td></td><td> 0,503144617 </td><td> 4.32907E-05 </td></tr><tr><td> Protocadherin 21 </td><td> NM_130878 </td><td> 1418304_at </td><td></td><td> 0,152671849 </td><td> 8.57783E-06 </td><td></td><td> 0,670714726 </td><td> 1.56309E-05 </td></tr><tr><td> cornichon omologo 3 (Drosophila) </td><td> NM_028408 </td><td> 1419517_at </td><td></td><td> 0,153724144 </td><td> 8.90755E-06 </td><td></td><td> 0.95780695 </td><td> 0,661055608 </td></tr><tr><td> harakiri, BCL2 proteine ​​interagenti (contiene solo BH3 dominio) </td><td> BQ175572 </td><td> 1439854_at </td><td></td><td> 0,154284407 </td><td> 2.0118E-05 </td><td></td><td> 0.56516812 </td><td> 4.86925E-09 </td></tr><tr><td> carboidrati (N-acetilgalattosamina 4-0) sulfotransferasi 9 </td><td> AK017407 </td><td> 1431897_at </td><td></td><td> 0,155238951 </td><td> 5.37423E-06 </td><td></td><td> 1.14910007 </td><td> 0,215637733 </td></tr><tr><td> calpaina 3 </td><td> AI323605 </td><td> 1433681_x_at </td><td></td><td> 0,160871988 </td><td> 1.07655E-05 </td><td></td><td> 0,477164757 </td><td> 1.33753E-11 </td></tr><tr><td> dito di zinco, dominio CCHC contenente 5 </td><td> BQ126004 </td><td> 1437355_at </td><td></td><td> 0,161812078 </td><td> 3.08262E-06 </td><td></td><td> 0,421252632 </td><td> 0.01152969 </td></tr><tr><td> loricrin </td><td> NM_008508 </td><td> 1448745_s_at </td><td></td><td> 0,165129967 </td><td> 1.86362E-05 </td><td></td><td> 0,639733409 </td><td> 0,000729772 </td></tr><tr><td> spondina 1, (f-spondina) di proteine ​​della matrice extracellulare </td><td> BC020531 </td><td> 1451342_at </td><td></td><td> 0,168035879 </td><td> 6.67867E-07 </td><td></td><td> 0,821042412 </td><td> 0,023650765 </td></tr><tr><td> RIKEN cDNA A930035E12 gene </td><td> AV348640 </td><td> 1429906_at </td><td></td><td> 5.9086795 </td><td> 1.747E-07 </td><td></td><td> 1,470383201 </td><td> 0,104085454 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> BB247294 RIKEN full-length arricchito, 7 giorni neonato Mus musculus cervelletto clone cDNA A730018G18 3 &#39;, sequenza di mRNA. </td><td> BB247294 </td><td> 1447907_x_at </td><td></td><td> 5.9047494 </td><td> 1.04931E-05 </td><td></td><td> 1,968147585 </td><td> 0.00010636 </td></tr><tr><td> Dominio FERM contenente 3 </td><td> BB099015 </td><td> 1437075_at </td><td></td><td> 5.860216 </td><td> 0,000345581 </td><td></td><td> 2,780297178 </td><td> 1.83072E-06 </td></tr><tr><td&gt; Neuronale pentraxina 2 / / / proteine ​​ipotetico LOC100044234 </td><td> NM_016789 </td><td> 1420720_at </td><td></td><td> 5.7568517 </td><td> 1.34227E-06 </td><td></td><td> 2,652516957 </td><td> 0,000206279 </td></tr><tr><td> Sequenze trascritte </td><td> BG076361 </td><td> 1460101_at </td><td></td><td> 5.657735 </td><td> 2.5015E-06 </td><td></td><td> 1,296248831 </td><td> 0.22870031 </td></tr><tr><td> spondina 1, (f-spondina) di proteine ​​della matrice extracellulare </td><td> BC020531 </td><td> 1424415_s_at </td><td></td><td> 0.17783576 </td><td> 1.01658E-06 </td><td></td><td> 0,836181248 </td><td> 0,001380141 </td></tr><tr><td> calbindin-28K </td><td> BB246032 </td><td> 1448738_at </td><td></td><td> 0,180317904 </td><td> 1.35961E-05 </td><td></td><td> 0,647334052 </td><td> 4.12268E-09 </td></tr><tr><td> Marcks-come 1 </td><td> AV110584 </td><td> 1437226_x_at </td><td></td><td> 0,186235935 </td><td> 1.47067E-06 </td><td></td><td> 0,499291387 </td><td> 2.34984E-08 </td></tr><tr><td> matrilin 2 </td><td> BB338441 </td><td> 1455978_a_at </td><td></td><td> 0,187783528 </td><td> 6.19122E-05 </td><td></td><td> 0.8967688 </td><td> 0,282337853 </td></tr><tr><td> matrilin 2 </td><td> BC005429 </td><td> 1419442_at </td><td></td><td> 0,188195795 </td><td> 0,000105295 </td><td></td><td> 0,915528892 </td><td> 0.35282097 </td></tr><tr><td> spondina 1, (f-spondina) di proteine ​​della matrice extracellulare </td><td> BQ175871 </td><td> 1442613_at </td><td></td><td> 0,189956563 </td><td> 9.41195E-06 </td><td></td><td> 0,861033222 </td><td> 0.1394266 </td></tr><tr><td> arrestina 3, della retina </td><td> NM_133205 </td><td> 1450329_a_at </td><td></td><td> 5.2130346 </td><td> 2.90599E-05 </td><td></td><td> 3,944218329 </td><td> 1.07437E-07 </td></tr><tr><td> RIKEN cDNA A330050F15 gene </td><td> AV325555 </td><td> 1457558_at </td><td></td><td> 0.19186781 </td><td> 0,000119342 </td><td></td><td> 0,660282035 </td><td> 2.47342E-05 </td></tr><tr><td> contactin 3 </td><td> BB559510 </td><td> 1438628_x_at </td><td></td><td> 0,194404608 </td><td> 4.08641E-07 </td><td></td><td> 0,918742591 </td><td> 0,022545297 </td></tr><tr><td> calbindin-28K </td><td> BB246032 </td><td> 1417504_at </td><td></td><td> 0,196381321 </td><td> 2.24182E-05 </td><td></td><td> 0,619305124 </td><td> 3.6222E-06 </td></tr><tr><td> gastrina rilasciando peptide </td><td> BC024515 </td><td> 1424525_at </td><td></td><td> 4.9436426 </td><td> 3.00588E-05 </td><td></td><td> 2,752845903 </td><td> 5.72954E-07 </td></tr><tr><td> sortilin legati VPS10 dominio contenente recettore 3 </td><td> AK018111 </td><td> 1425111_at </td><td></td><td> 4.885766 </td><td> 1.03645E-05 </td><td></td><td> 1.29051599 </td><td> 0,029733649 </td></tr><tr><td> recettore della dopamina D1A </td><td> BE957273 </td><td> 1455629_at </td><td></td><td> 4.869493 </td><td> 3.77525E-05 </td><td></td><td> 1,815881979 </td><td> 0,000516498 </td></tr><tr><td> proprotein convertasi subtilisina / kexin tipo 5 </td><td> BB241731 </td><td> 1437339_s_at </td><td></td><td> 0,210528027 </td><td> 7.83039E-05 </td><td></td><td> 0,574126078 </td><td> 9.15496E-05 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> interleuchina 1 recettore di tipo I </td><td> NM_008362 </td><td> 1448950_at </td><td></td><td> 0,210572243 </td><td> 9.64524E-06 </td><td></td><td> 0,241135352 </td><td> 2.79816E-08 </td></tr></tbody></table>

dissezione di giro dentato ippocampale di topo adulto

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

L&#39;ippocampo è una delle zone più studiati nel cervello a causa del suo importante ruolo funzionale nella elaborazione della memoria e l&#39;apprendimento, la sua notevole plasticità delle cellule neuronali, e il suo coinvolgimento in epilessia, malattie neurodegenerative, e disturbi psichiatrici. L&#39;ippocampo è composto da diverse regioni, il giro dentato, che comprende principalmente i neuroni dei granuli, e corno di Ammon, che comprende principalmente i neuroni piramidali, e le due regioni sono collegate da entrambi i circuiti anatomici e funzionali. Molti mRNA differenti e le proteine ​​sono selettivamente espresse nel giro dentato, e il giro dentato è un sito di neurogenesi adulta, cioè nuovi neuroni sono continuamente generati nel giro dentato adulti. Per studiare l&#39;espressione di mRNA e proteine ​​specifiche per il giro dentato, microdissezione laser capture viene spesso utilizzata. Questo metodo ha alcune limitazioni, tuttavia, come la necessità di apparecchiature particolari e complicate procedure di gestione. In questo video-registrato protocollo, abbiamo dimostrato una tecnica di dissezione per la rimozione del giro dentato da topo adulto sotto uno stereomicroscopio. Campioni giro dentato preparato con questa tecnica sono adatte ad ogni test, tra cui trascrittomica, proteomica e analisi di biologia delle cellule. Abbiamo confermato che il tessuto è sezionato giro dentato conducendo PCR in tempo reale di giro dentato geni specifici, triptofano 2,3-diossigenasi (TDO2) e desmoplakina (Dsp), e Ammon corno geni arricchito, Meis legati 1b gene (Mrg1b ) e TYRO3 proteina tirosin-chinasi 3 (Tyro3). Le espressioni di mRNA TDO2 e Dsp nei campioni giro dentato Sono state rinvenute, ovviamente, più elevati, mentre Mrg1b e Tyro3 erano più bassi livelli, rispetto a quelle dei campioni del corno di Ammone. Per dimostrare il vantaggio di questo metodo, abbiamo effettuato delle analisi del DNA microarray utilizzando campioni di ippocampo intero e giro dentato. L&#39;espressione di mRNA TDO2 e DSP, che sono espressi selettivamente nel giro dentato, nell&#39;ippocampo tutto di alfa-CaMKII + / - topi esposti 0,037 e 0,10 volte i cambiamenti rispetto a quella di topi wild-type, rispettivamente. Nel giro dentato isolato, però, queste espressioni esposti 0,011 e 0,021 volte modifiche rispetto a quella di topi wild-type, dimostrando che i cambiamenti dell&#39;espressione genica in giro dentato possono essere rilevati con maggiore sensibilità. Nel loro insieme, questa tecnica dissezione comodo e preciso in modo attendibile utilizzato per studi si sono concentrati sul giro dentato.

Una tecnica di dissezione per la rimozione del giro dentato da topo adulto allo stereomicroscopio è stata dimostrata in questo video-registrato di protocollo.

Dissezione di giro dentato ippocampale di topo adulto

L'ippocampo è una delle aree del cervello più ampiamente studiate a causa del suo importante ruolo funzionale nell'elaborazione della memoria e nell'apprendimento, della sua...

L'ippocampo è una delle aree più ampiamente studiate del cervello a causa del suo importante ruolo funzionale nell'elaborazione della memoria. È noto per la sua notevole neuroplasticità e per il coinvolgimento nell'epilessia, nelle malattie neurodegenerative e nei disturbi psicologici. L'ippocampo è composto da regioni distinte: il giro dentato, CA1 e CA3.Il giro DTO è un sito di neurogenesi e molti ricercatori potrebbero essere interessati a questa regione. In questo protocollo video registrato, mostriamo una tecnica di dissezione per rimuovere i giri DTO dalla bocca di adulti sotto un microscopio sterile. Questa tecnica ci consente di isolare e ottenere interi preparati intatti dei giri DTO.La tecnica è molto utile perché è possibile ottenere e utilizzare una grande quantità di proteine, mease e neuroni dai campioni di gel enterici per qualsiasi tipo di saggio, inclusi analisi trascrittomica, proteomica e di biologia del CE. Ecco il dottor Gil. Sta dimostrando la sua eccellente tecnica di dissezione in questo filmato.Lei, ho guardato un filmato ed sono rimasto colpito da quanto abilmente e con quanta fluidità Lei disseca il giro. Ha la tecnica di un esperto. Quante volte ha dovuto esercitarsi con questa tecnica per raggiungere un tale livello di competenza?Ho eseguito più di 100 dissezioni di GY d'epoca utilizzando questa tecnica, ma probabilmente mi sono bastate solo 20 dissezioni per raggiungere questo livello di abilità. Pensa che qualcuno interessato a questa tecnica possa acquisire questa competenza? Sì, lo penso.Ma è essenziale avere un buon controllo delle mani e delle dita. Ci sono suggerimenti che può darci o aspetti a cui dovremmo prestare attenzione durante l'esecuzione di questa tecnica? Sì. Quando si rimuove il diaframma, è molto importante non danneggiare l'ippocampo o le aree circostanti.Un tale infortunio renderà difficile identificare i confini tra la tenite e la sede naturale del braccio. Mantenere ben definiti tali confini in quel paziente è fondamentale. Grazie. Ecco.Ok, iniziamo. Posizionare il cervello in HighCo.PVS. Tagliare il cervello lungo l'asse longitudinale al.Tagliare quelle lesioni posteriormente rispetto al laden. Posizionare il penia media cellulare con l'altro lato rivolto verso l'alto ed eliminare i vari elementi. Questo è il lato misurato dell'ippocampo.È possibile osservare il confine tra Ditis e la regione CS tre. Inserire una punta di ago su ciascun lato di Ditis e far scorrere l'ago lungo l'asse temporale settico fino a quando l'ippocampo è stato isolato. I.

dissection-of-hippocampal-dentate-gyrus-from-adult-mouse

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Questo articolo descrive le procedure per la preparazione di fettine di ippocampo di ratti e topi transgenici per lo studio delle alterazioni sinaptiche associate con l'invecchiamento cerebrale e le malattie neurodegenerative legate all'età, come la malattia di Alzheimer.

Preparazione di acuta fettine di ippocampo di ratti e topi transgenici per lo studio delle alterazioni sinaptiche durante l&#39;invecchiamento e Amiloide Patologia

Questo video dimostra la registrazione dell'attività ritmica della rete neuronale, nota anche come oscillazioni theta, in un ippocampo isolato. Gli elettrodi vengono inseriti in vari strati e posizioni spaziali per rilevare e analizzare le oscillazioni theta. Questo mostra le composizioni neuronali uniche e la connettività della rete neuronale attraverso diversi strati dell'ippocampo.

Registrazione in vitro delle oscillazioni theta nell'ippocampo del topo

Questo articolo presenta una metodologia completa per preparare e...

Miglioramento della preparazione e la conservazione di fette mouse ippocampo per una registrazione molto stabile e riproducibile di potenziamento a lungo termine

Descriviamo due metodi per la visualizzazione e la quantificazione dell'arborizzazione dendritica nell'ippocampo di modelli murini: imaging in tempo reale e con profondità di campo estesa. Mentre il primo metodo consente un sofisticato tracciamento topografico e la quantificazione dell'estensione della ramificazione, il secondo consente una rapida visualizzazione dell'albero dendritico.

Valutazione della dendritiche arborizzazione nel giro dentato della Regione ippocampale nei topi

Viene descritto un protocollo per generare un sistema di co-coltura costituito da neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC), neuroni corticali primari e astrociti. Questo sistema di co-coltura consente di rilevare la formazione di contatti sinaptici e circuiti tra nuovi neuroni derivati da iPSC e neuroni corticali preesistenti che esprimono la canalrodopsina-2.

Un approccio per la valutazione optogenetic Formazione di connessioni neuronali in un sistema di co-coltura

Questo metodo descrive una preparazione cronica che consente l'accesso ottico all'ippocampo di topi viventi. Questa preparazione può essere utilizzata per eseguire l'imaging ottico longitudinale della plasticità strutturale neuronale e della plasticità cellulare evocata dall'attività per un periodo di diverse settimane.

Imaging longitudinale a due fotoni dell'ippocampo dorsale CA1 in topi vivi

Questo è un protocollo per la preparazione a slice acuta da ippocampo di topi adulti e invecchiamento che sfrutta la perfusione transcardiale e il taglio delle fette con NMDG-aCSF ghiacciato per ridurre i danni ipossici al tessuto. Le fette risultanti rimangono sane per molte ore e sono adatte per le registrazioni di patch e field a lungo termine.

Ridurre al minimo l'ipossia nelle fette di ippocampale da topi adulti e anziani

Questo articolo ha lo scopo di descrivere un protocollo sistematico per ottenere fette orizzontali del cervello ippocampale nei topi. L'obiettivo di questa metodologia è preservare l'integrità delle vie della fibra ippocampale, come il percorso perforante e il tratto di fibra muschiata per valutare i processi neurologici correlati al giro dentato.

Fette ippocampali orizzontali del cervello del topo

Presentiamo un protocollo per preparare fette acute dall'ippocampo dorsale-intermedio dei topi. Confrontiamo questa preparazione trasversale con l'affezione coronale in termini di qualità delle registrazioni e conservazione delle caratteristiche morfologiche dei neuroni registrati.

Preparazione di fette acute dall'ippocampo dorsale per la registrazione a cellule intere e la ricostruzione neuronale nel giro dentato di topi adulti

Qui, dimostriamo come combinare la trasfezione di neuroni primari di roditori ippocampali con l'imaging confocale su cellule vive per analizzare gli effetti patologici indotti dalle proteine sul trasporto assonale e identificare percorsi meccanicistici che mediano questi effetti.

Utilizzo dell'imaging su cellule vive per misurare gli effetti delle proteine patologiche sul trasporto assonale nei neuroni primari dell'ippocampo

Impara la dissezione del giro dentato ippocampale di topo adulto utilizzando uno stereomicroscopio. Questa tecnica consente di ottenere campioni intatti per analisi trascrizomiche e proteomiche.

Dissezione di giro dentato ippocampale di topo adulto

Esplora altri video