Determinazione della reattività e Titolo di siero usando un test dell'emoagglutinazione

Determinazione della reattività e del titolo del siero utilizzando un test delle emoagglutinine. Una nazione glutinica è una reazione che avviene tra anticorpi solubili e antigeni particolati. Questi possono includere cellule o trasportare molecole.

Gli epitopi sulla superficie del vettore consentono a un anticorpo di legarsi e reticolare il portatore, portando alla formazione di un reticolo complesso chiamato complesso antigene-anticorpo. L'agglutinazione dell'orlo è una forma specifica di agglutinazione in cui gli anticorpi si legano ai globuli rossi, che agiscono come antigene del particolato. I globuli rossi sono bersagli utili in quanto sono entrambi prontamente disponibili e i risultati possono essere facilmente visti ad occhio nudo.

I campioni di siero vengono diluiti in serie e quindi inseriti in una piastra ubo a 96 pozzetti. Viene quindi aggiunta una sospensione di globuli rossi Riva cells. Quando gli anticorpi si presentano ad alta concentrazione, il legame con i globuli rossi avviene formando un grande reticolo.

Poiché questo reticolo si deposita per gravità, si conforma alla forma della placca ubo. Se visto dall'alto, si vede un ampio foglio di globuli rossi. Questa è una reazione positiva all'emoagglutinina.

Quando i livelli di anticorpi sono bassi, non si può formare alcun reticolo e i globuli rossi si conformano alla forma della piastra UBO e si concentrano alla base formando un piccolo pellet. Questa è una reazione negativa di agglutinazione dell'orlo. Questo diagramma mostra una reazione positiva.

Le cellule formano un reticolo mentre si depositano, si conformano alla forma della piastra inferiore a U. A sinistra e a destra, vediamo la vista dall'alto dove si vede un ampio foglio di globuli rossi. Se è presente una quantità intermedia di anticorpi, si osserverà la formazione di alcune lettere.

L'agglutinazione dell'orlo consente anche di testare la reattività di diversi campioni di siero rispetto all'antigene noto. È inoltre possibile determinare il titolo del campione di siero. Il titolo è l'ultima diluizione in cui si è vista una reazione positiva.

Normalmente, maggiore è la concentrazione di anticorpi nel campione di siero, maggiore è il titolo. Questo diagramma mostra una reazione negativa di agglutinazione dell'orlo. Anticorpo insufficiente per reticolare i globuli rossi.

Quando le cellule si depositano per gravità, scivolano lungo il lato del pozzetto formando un pellet stretto sul fondo. Il diagramma a destra mostra i globuli rossi visti dall'alto. Per questo esperimento, avrai bisogno di 1 piastra inferiore a 96 pozzetti U.

È essenziale utilizzare una piastra inferiore a U poiché le piastre a fondo piatto non consentiranno alle celle di sedimentare in un pellet, rendendo impossibile l'interpretazione. Un animale domestico in grado di erogare 50 microlitri di siero di test, una sospensione all'1% di cellule Riva e una soluzione una tantum di soluzione salina tampone verone per ogni pozzetto di fila. Da uno a 12, eroga 50 microlitri di soluzione salina tampone roal.

Questo viene utilizzato come diluente. Ora metti 50 microlitri di siero nel pozzo, uno uno. Questa è la tua prima diluizione una su due.

Usando il perpet, assicurarsi che il campione di siero sia accuratamente miscelato. Una volta miscelati, prelevare 50 microlitri dal pozzetto A uno e trasferirli nel pozzetto A due. Questa è la tua seconda diluizione su due, dandoti una diluizione di quattro volte.

Continuare questa serie di diluizioni utilizzando i pozzetti da tre a 11. Non inserire alcun siero in, beh, 12 poiché questo è il controllo salino negativo del tampone roal. Ora prendete la vostra sospensione all'1% di celle Riva, che è stata accuratamente miscelata e trasferite 50 microlitri in, beh, uno fino al pozzo A 12.

Una volta aggiunte le cellule, coprire la piastra e picchiettare delicatamente la piastra per assicurarsi che i campioni e le cellule siano miscelati. Ora incubare a 37 gradi per 60 minuti. Un'incubatrice umidificata è appropriata.

Durante il periodo di incubazione di 60 minuti, si verificheranno interazioni antigene-anticorpo e le cellule inizieranno a depositarsi. Il filmato che stai visualizzando è una fotografia time lapse dell'intero periodo di 60 minuti. Questo è un primo piano dei pozzi da cinque a 10.

Abbiamo già esaminato, beh, 12, che era il tuo controllo VBS in questo. Ebbene, le cellule avevano formato un pallino stretto che indicava che il test aveva funzionato in modo appropriato. I pozzi cinque e sei sono esempi di agglutinazione positiva dell'orlo.

Beh, il sette è un esempio di un risultato di agglutinazione intermedio, mentre i pozzetti otto, nove e 10 sono negativi per l'agglutinazione dell'orlo. Sulla base di questo risultato, il titolo sarebbe stato determinato in base alla diluizione del pozzetto, sette, poiché questo era l'ultimo pozzetto, dove è stata osservata una reazione positiva.