Name: Primario cellule epiteliali bronchiali umane Grown da espianti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00.000+00:00
Duration: 14 min 32 s
Description: Scopri un protocollo per coltivare cellule epiteliali bronchiali primarie da espianti umani, utilizzando interfaccia aria-liquido per la differenziazione. Questo metodo supporta la ricerca sulle malattie polmonari.

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Gli autori sono molto grati al dottor Richard Inculet per aver fornito i tessuti bronchiali. Ricerca etica approvazioni consiglio sono stati ottenuti da San Giuseppe Healthcare Hamilton e The University of Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr. David McCormack), Tissue and Archives Comitato, Dipartimento di Patologia. Ringraziamo anche Ernie Spitzer (Microscopia Elettronica, McMaster University) per aver fornito TEM delle nostre culture ALI, Farkas e Daniela per aver fornito alcuni dei materiali necessari per immunocolorazione. Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione di blocco termine dalla Società Ontario Toracica; Dr. Asma Yaghi è stato sostenuto da una borsa di studio FSORC, Sanità San Giuseppe, Hamilton, Ontario, Canada.

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</ol>

In questo studio abbiamo presentato i metodi dettagliati per la cultura e l&#39;espansione delle primarie cellule epiteliali bronchiali umane. Abbiamo dimostrato come espianti e trapianti di tessuto bronchiale, colta nei media che promuovono la crescita delle cellule epiteliali, in grado di fornire una fonte continua di cellule epiteliali delle vie respiratorie umane per gli studi di non-differenziati modelli cellulari (in immersione) e differenziata (cresciuta in aria-liquido) . Queste cellule possono essere utilizzate...

Altri requisiti: incubatore, biologici di sicurezza cabinet (BSC), centrifughe, piastre di coltura da 100 mm, provette sterili (15 ml, 50 ml, e 2 ml), puntali sterili, manico bisturi e lame, di piccole forbici affilate, camici e guanti. Questi possono essere ottenuti dai vostri fornitori preferiti.

primario cellule epiteliali bronchiali umane grown da espianti

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Cellule epiteliali bronchiali umane sono necessarie per modelli cellulari della malattia e per indagare l&#39;effetto di eccipienti e agenti farmacologici sulla funzione e la struttura delle cellule epiteliali umane. Qui si descrivono in dettaglio il metodo di coltivazione cellule epiteliali bronchiali dal tessuto delle vie aeree bronchiali che viene raccolto dal chirurgo al momento della chirurgia polmonare (ad esempio il cancro ai polmoni o di riduzione del volume polmonare). Con l&#39;approvazione etica e il consenso informato, il chirurgo prende ciò che è necessario per patologia e ci fornisce una porzione bronchiale che è lontano dalle zone malate. Il tessuto viene quindi utilizzato come fonte di espianti che possono essere utilizzati per la coltivazione di cellule primarie epiteliali bronchiali in coltura. Segmenti bronchiali circa 0,5-1cm di lunghezza e ≤ 1 centimetro di diametro, sono sciacquati con EBSS freddi e eccesso di tessuto parenchimale è stato rimosso. I segmenti sono tagliati aperti e tritata in 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; Pezzi di tessuto. I pezzi sono usati come fonte di cellule primarie. Dopo piastre di coltura rivestimento 100 millimetri per 1-2 ore con una combinazione di collagene (30 mg / ml), fibronectina (10 mg / ml), e BSA (10 mg / ml), le piastre sono graffiati in zone 4-5 e tessuti i pezzi sono posti in aree graffiato, allora terreno di coltura (DMEM / Ham F-12 con additivi) adatto per la crescita delle cellule epiteliali viene aggiunto e le piastre sono poste in un incubatore a 37 ° C in 5% di CO<sub&gt; 2</subAria&gt; umidificata. Il terreno di coltura viene cambiato ogni 3-4 giorni. Le cellule epiteliali crescono dai pezzi che formano anelli di circa 1,5 cm di diametro in 3-4 settimane. Espianti possono essere riutilizzati fino a 6 volte spostandoli in nuovi preverniciato piatti. Le cellule sono sollevati utilizzando tripsina / EDTA, in pool, contati, e ri-placcato in fiaschi cellulare T75 Bind per aumentare il loro numero. T75 fiaschi seminato con 2-3 milioni di cellule crescono confluenza a 80% in 4 settimane. Espanse cellule primarie umane epiteliali possono essere coltivate e ha permesso di differenziare in aria-liquido. Metodi descritti qui fornire una fonte abbondante di cellule epiteliali bronchiali umane isolate da tessuti freschi e permettono di studiare queste cellule come modelli di malattie e per la farmacologia e lo screening tossicologico.

Qui si descrive un metodo dettagliato per la coltivazione primaria cellule epiteliali bronchiali umane da espianti di tessuti umani delle vie aeree bronchiali tra cui la crescita differenziati su un aria-liquido. Questo metodo fornisce una fonte abbondante di cellule primarie per indagare il ruolo dell&#39;epitelio delle vie aeree dei polmoni umani nella salute e nella malattia.

Primario cellule epiteliali bronchiali umane Grown da espianti

Le cellule epiteliali bronchiali umane sono necessarie per i modelli cellulari di patologie e per indagare l'effetto di eccipienti e agenti farmacologici su...

In questo articolo descriviamo un protocollo per la crescita e l'espansione di cellule epiteliali bronchiali umane ottenute da segmenti bronchiali umani appena isolati. Questo protocollo comprende cinque sezioni: codifica e graffiatura, piastre di coltura da cento millimetri, riparazione del tessuto bronchiale, trapianti di tessuto bronchiale espiantato e passaggio di cellule epiteliali bronchiali umane ciliate in crescita, cellule epiteliali bronchiali umane su transwell. Prima di iniziare, si noti che tutti i passaggi vengono eseguiti all'interno della cappa a sicurezza biologica.Salvo diversa indicazione, leggere la sezione sui materiali, i reagenti e la preparazione e assicurarsi di aver effettuato i preparativi di base. I seguenti passaggi: codifica, soluzioni di dissociazione, soluzioni di rivestimento e graffiatura, colture con soluzioni stock e terreni di coltura. Le piastre da coltura da cento millimetri devono essere eseguite nel bst.Mantieni tutto sterile. Posiziona piastre di coltura sterili da cento millimetri e la soluzione di rivestimento. Con la pipetta BST, aggiungi due millilitri di soluzione di rivestimento nella piastra da cento millimetri e agita delicatamente

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Cellule epiteliali nasali, ottenuti attraverso superficiale raschiare la biopsia di volontari umani, vengono ampliati e trasferite su inserti di coltura tissutale. Dopo aver raggiunto la confluenza, le cellule sono coltivate a interfaccia liquido aria, ottenendo colture di cellule ciliate e non ciliate. Colture di cellule epiteliali nasali differenziate offrono modelli sperimentali validi per lo studio della mucosa respiratoria.

Coltura di cellule umane nasale epiteliali presso l&#39;Air Interface Liquid

Questa pubblicazione dimostra metodi per il campionamento e la coltura di successo della mucosa epiteliale nasale dai bambini e per la riprogrammazione di queste cellule in cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC).

Coltivare cellule primarie epiteliali nasali da bambini e riprogrammare in cellule staminali pluripotenti indotte

Le cellule epiteliali bronchiali umane primarie sono difficili da trasdurre. Questo protocollo descrive la produzione di lentivirus e la loro concentrazione, nonché le condizioni di coltura ottimali necessarie per ottenere trasduzioni altamente efficienti in queste cellule durante la differenziazione in un epitelio pseudostratificato.

Ottimale Lentivirus di produzione e colture cellulari condizioni necessarie al successo le cellule trasdurre primario dell&#39;uomo epiteliali bronchiali

Questo articolo fornisce una metodologia dettagliata per la dissociazione dei tessuti e gli approcci di frazionamento cellulare che consentono l'arricchimento di cellule epiteliali vitali dalle regioni prossimali e distali del polmone umano. Qui questi approcci sono applicati per l'analisi funzionale di cellule progenitrici epiteliali polmonari attraverso l'uso di modelli di coltura di organoidi 3D.

Isolamento e arricchimento di cellule progenitrici epiteliali polmonari umane per la coltura di organoidi

Qui descriviamo l'isolamento, l'amplificazione e la differenziazione delle cellule epiteliali nasali umane primarie (HNE) all'interfaccia aria-liquido e un protocollo di biobanking che consente di congelare e quindi scongelare con successo l'HNE amplificato. Il protocollo analizza le proprietà elettrofisiologiche delle cellule HNE differenziate e la correzione della secrezione di cloruro correlata al CFTR su diversi trattamenti modulatori.

Cellule epiteliali nasali umane primarie: biobanking nel contesto della medicina di precisione

Il protocollo presenta un metodo per derivare organoidi polmonari umani da tessuti polmonari primari, espandere gli organoidi polmonari e indurre la differenziazione prossimale per generare organoidi delle vie aeree 3D e 2D che fenocopio fedelmente l'epitelio delle vie aeree umane.

Stabilire organoidi polmonari umani e differenziazione prossimale per generare organoidi maturi delle vie aeree

Il presente protocollo descrive le cellule staminali pluripotenti derivate dall'uomo di tipo 2 alveolari epiteliali (iAT2s). Queste cellule possono essere coltivate come sfere auto-rinnovanti in coltura 3D o adattate alla coltura di interfaccia aria-liquido (ALI).

Generazione di sfere 3D e colture di interfaccia aria-liquido 2D di cellule epiteliali alveolari di tipo 2 derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo

I recenti progressi nei protocolli di differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo consentono la derivazione graduale di tipi di cellule specifiche per organo. Qui, forniamo passaggi dettagliati per il mantenimento e l'espansione delle cellule basali delle vie aeree derivate da iPSC e la loro differenziazione in un epitelio mucociliare in colture di interfaccia aria-liquido.

Generazione di colture di interfaccia aria-liquido di cellule epiteliali delle vie aeree da cellule staminali pluripotenti umane

Presentato qui è un metodo riproducibile, economico e robusto per l'isolamento e l'espansione delle cellule epiteliali bronchiali primarie per il biobanking a lungo termine e la generazione di cellule epiteliali differenziate mediante coltura all'interfaccia aria-liquido.

Isolare le cellule epiteliali bronchiali dal tessuto polmonare resecato per il biobanking e stabilire colture di interfaccia aria-liquido ben differenziate

La coltura dell'interfaccia aria-liquido è comunemente usata per sviluppare epitelio pseudostratificato delle vie aeree differenziando le cellule epiteliali bronchiali umane normali primarie che imitano il lato apicale delle vie aeree polmonari. Qui, descriviamo un semplice protocollo per determinarne la qualità monitorando le sue proprietà biofisiche, come la funzione ciliare e l'integrità della membrana.

Determinazione della funzione ciliare e dell'impermeabilità della membrana dell'epitelio pseudostratificato delle vie aeree polmonari

Scopri un protocollo per coltivare cellule epiteliali bronchiali primarie da espianti umani, utilizzando interfaccia aria-liquido per la differenziazione. Questo metodo supporta la ricerca sulle malattie polmonari.

Primario cellule epiteliali bronchiali umane Grown da espianti

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