Name: Ottimizzato fibrina Gel Bead Assay per lo studio della angiogenesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 14 s
Description: Impara l'assay con perline di fibrina per studiare l'angiogenesi in vitro usando cellule endoteliali umane. Questo metodo permette di visualizzare la formazione di nuovi vasi sanguigni con imaging time-lapse.

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CELLE DI PREPARAZIONE <ol><li> Portare HUVEC e fibroblasti in M199/10% FBS / Pen-Strep (1:100) 1-2 giorni prima della bordatura. </li><li> Passa medio EGM-2 (Clonetics) il giorno prima per bordare HUVEC e il giorno prima di embedding per fibroblasti. </li><li> Una concentrazione di ~ 400 HUVEC al tallone è necessario. </li><li> 20.000 fibroblasti per pozzetto è necessario. </li></ol> RIVESTIMENTO CON LE PERLE HUVEC - GIORNO -1 <ol><li> Trypsinize HUVEC. </li><li> Lasciare perle di stabilirsi (NON CENTRIFUGA!). Aspirare il surnatante e lavare le perline brevemente in 1 ml di caldo EGM-2 di media. </li><li> 2500 perline mix w / 1x10 6 HUVEC in 1,5 mL di caldo EGM-2 di media in un tubo di FACS. Posto verticalmente all&#39;interno dell&#39;incubatore. (Questo sarà sufficiente per circa 10 pozzi. Scala fino, se necessario) </li><li> Incubare per 4 ore a 37 ° C, agitando la provetta ogni 20 min. (Rivestimento Buona è fondamentale per la germinazione.) </li><li> Dopo 4 ore, trasferire le perle rivestite per un pallone T25 in 5 ml di EGM-2 e lasciare O / N. </li></ol> INCASSO PERLE RIVESTITO IN FIBRINA GEL - GIORNO 0 <ol><li> Preparare il mg / ml soluzione di fibrinogeno 2,0 (vedi sezione ricette). </li><li> Aggiungi 0,15 Unità / ml di aprotinina alla soluzione fibrinogeno. </li><li> Trasferimento perle rivestite per un tubo 15 ml conica e lasciate perline stabilirsi. Perline risospendere in 1 ml di EGM-2 e trasferimento in un tubo da centrifuga 1,5 ml. </li><li> Lavare le perle 3 volte con 1 ml di EGM-2 da pipeting su e giù lentamente. </li><li> Contare perle su un vetrino e risospendere in soluzione fibrinogeno ad una concentrazione di circa 500 perline / mL. </li><li> Aggiungi 0,625 Unità / ml di trombina in ciascun pozzetto. </li><li> Aggiungere 0,5 ml di sospensione fibrinogeno / perla a ciascun pozzetto di una 24-pozzetti. Cambia la punta della pipetta per ogni bene! </li><li> Mescolare la trombina e il fibrinogeno andando su e giù delicatamente con la punta della pipetta ~ 4 a 5 volte. Fare attenzione a non fare bolle di grandi dimensioni. </li><li> Lascia la piastra per 5 minuti nel cofano, poi metterlo nel 37 ° C-incubatore per 10-15 minuti per generare un coagulo. </li><li> In attesa del coagulo, trypsinize fibroblasti. </li><li> Aggiungere 1 ml di EGM-2 per pozzetto goccia a goccia. </li><li> Fibroblasti seme sulla cima di fibrina gel ad una concentrazione di 20.000 cellule per pozzetto. </li></ol> NOTE: Di solito, quando il gel di fibrina si forma, si vedrà bollicine nel gel. Non preoccupatevi, spariranno in 3-4 giorni. Cambiare il supporto a giorni alterni, cioè, Giorno 2, 4, 6, ecc .. Di giorno 3 o 4 si dovrebbe iniziare a vedere germogliare.

<ol><li>Nehls, V., Drenckhahn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microcarrier-based+cocultivation+system+for+the+investigation+of+factors+and+cells+involved+in+angiogenesis+in+three-dimensional+fibrin+matrices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A microcarrier-based cocultivation system for the investigation of factors and cells involved in angiogenesis in three-dimensional fibrin matrices in vitro.</a> Histochem Cell Biol. 104, 459-466 (1995).</li>
<li>Nehls, V., Drenckhahn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel%2C+microcarrier-based+in+vitro+assay+for+rapid+and+reliable+quantification+of+three-dimensional+cell+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">A novel, microcarrier-based in vitro assay for rapid and reliable quantification of three-dimensional cell migration and angiogenesis.</a> Microvasc Res. 50, 311-322 (1995).</li>
</ol>

C&#39;è un consenso crescente che tridimensionali (3D) saggi in vitro angiogenesi offrire un modello che è molto più vicino all&#39;ambiente reale in vivo che può essere raggiunto utilizzando culture 2D. È evidente che sistemi 3D superiore dovrebbe essere riproducibile, ed essere in grado di mimare alcuni dei passaggi principali di angiogenesi. Mentre diversi saggi precedenti 3D sono stati sviluppati, molti di questi utilizzare difficili da ottenere cellule microvascolari, o solo ricapitolare alcune delle tappe. In questo video, si descrive...

<table><tbody><tr><td>Perle Cytodex-3</td><td>Reagente</td><td>Amersham</td><td>17-0485-01</td><td>10 g/flacone. Idratare e gonfiare da 1,0 a 5 g di perle secche in 50 mL di PBS (pH = 7,4) per almeno 3 ore a temperatura ambiente. Utilizzare un tubo da 50 mL e posizionarlo sul rocker. 2. Lasciare sedimentare le perle (~15 min). Rimuovere il soprannatante e lavare le perle per alcuni minuti in PBS fresco (50 mL). 3. Rimuovere il PBS e sostituirlo con PBS fresco: 25 mL -&amp;gt; 20 mg/mL =&amp;gt; 60.000 perle/mL oppure 50 mL -&amp;gt; 10 mg/mL =&amp;gt; 30.000 perle/mL. 4. Collocare la sospensione di perle in un flacone di vetro silanizzato (Windshield Wiper o Sigmacote). 5. Sterilizzare le perle mediante autoclave per 15 min a 115&amp;#x00B0;C. 6. Conservare a 4&amp;#x00B0;C.</td></tr><tr><td>Aprotinina</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-1153</td><td>10 mg/flacone. Ricostruire l'aprotinina liofilizzata a 4 U/mL in acqua deionizzata. Filtrare in condizioni sterili. Preparare aliquote da 1 mL ciascuna. Conservare a -20 &amp;deg;C.</td></tr><tr><td>Fibrinogeno Tipo I</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-8630</td><td>1 g. Sciogliere il fibrinogeno in DPBS a una concentrazione di 2 mg/mL. Nota: verificare la percentuale di proteina coagulabile e regolare di conseguenza. Riscaldare in bagnomaria a 37 &amp;#x00B0;C per sciogliere il fibrinogeno. Mescolare capovolgendo il tubo. Non vortexare. Filtrare in condizioni sterili attraverso un filtro da 0,22 µm.</td></tr><tr><td>Trombina</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-3399</td><td>22 mg = 1.000 unità. Ricostruire in acqua sterile a 50 U/mL. Preparare aliquote da 0,5 mL ciascuna. Conservare a -20 &amp;deg;C.</td></tr></tbody></table>

ottimizzato fibrina gel bead assay per lo studio della angiogenesi

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

L&#39;angiogenesi è un complesso processo multi-step, dove, in risposta a stimoli angiogenici, vengono creati nuovi vasi da vasi esistenti. Questi passaggi sono: la degradazione della membrana basale, la proliferazione e la migrazione (germogliamento) delle cellule endoteliali (CE) nella matrice extracellulare, l&#39;allineamento della CE in corde, rami, la formazione di lume, anastomosi, e la formazione di una nuova membrana basale. Molti test in vitro sono stati sviluppati per studiare questo processo, ma la maggior parte solo mimare alcune fasi dell&#39;angiogenesi, e morfologicamente i vasi all&#39;interno del test spesso non assomigliano vasi in vivo. Sulla base di un precedente lavoro di Nehls e Drenckhahn, abbiamo ottimizzato un test in vitro che utilizza angiogenesi umano vena ombelicale CE e fibroblasti. Questo modello racchiude in sintesi tutte le fasi fondamentali all&#39;inizio di angiogenesi e, soprattutto, i vasi di visualizzazione brevetto lumen intercellulare circondato da polarizzata CE. CE sono rivestiti su microcarriers cytodex e incorporato in un gel di fibrina. I fibroblasti sono stratificate sulla parte superiore del gel in cui prevedono necessario fattori solubili che favoriscono CE spuntano dalla superficie delle perline. Dopo alcuni giorni, sono presenti numerosi vasi che possono essere facilmente osservati in contrasto di fase e microscopia time-lapse. Questo video illustra i passaggi chiave nella creazione di queste culture.

Questo video dimostra il protocollo di un test in vitro angiogenesi che ricapitola diverse fasi di angiogenesi. Time-lapse immagini di germinazione, formazione lumen, ramificazione e anastomosi - caratteristiche fondamentali di angiogenesi - sono mostrati.

Ottimizzato fibrina Gel Bead Assay per lo studio della angiogenesi

L'angiogenesi è un complesso processo multi-step in cui, in risposta a stimoli angiogenici, nuovi vasi vengono creati a partire dalla vascolarizzazione esistente. Questi ...

Ciao, mi chiamo Mar Katsu. Provengo dal laboratorio Hughes del Dipartimento di Biologia Molecolare e Biochimica della uc Irvine. Eseguirò il saggio del fibrina-bead.L'intero processo richiede due giorni per essere completato. Il primo giorno prevede il rivestimento delle perle con cellule endoteliali venose umbilicali umane o pubiche. Il secondo giorno prevede l'inclusione di queste perle rivestite in gel di fibrina e successivamente il sovrapposizione di fibroblasti su tali gel.Utilizziamo questo saggio per studiare i numerosi passaggi dell'angiogenesi in un contesto in vitro. Il primo giorno, nella parte uno, utilizziamo le microsfere CY X three Beads. Il secondo giorno, invece, impieghiamo questi tre reagenti: fibrinogeno, trombina e aprotinina cytx.I tre tipi di perline provengono da Amazon Biosciences e sono specificamente codificate per il collagene in modo che le cellule endoteliali aderiscano alle perline. Il reagente successivo è il fibrinogeno, che otteniamo da Sigma. Questo costituisce il gel o coagulo effettivo nel saggio con le perline.La trombina è un fattore della coagulazione. Questa proteina converte il fibrinogeno in fibrina, ed è per questo motivo che la aggiungiamo al saggio. L'aprotinina è un inibitore sierico delle proteasi.Utilizziamo questo per impedire alle proteasi di degradare il gel di fibrina. Quindi quello che vedete qui sono vac. Queste sono le cellule che utilizziamo per il saggio di contrazione.Queste particolari cellule, queste cellule si trovano alla fase tre. Normalmente le utilizziamo dalla fase due alla fase tre. Si può notare che hanno assunto questa caratteristica morfologia a selciato.In questo momento, ritengo che queste cellule abbiano raggiunto una confluenza del cento per cento e sarà necessario utilizzare queste cellule a tale confluenza. Questo è quindi il giorno uno del nostro saggio di beat due e questo è il modo in cui lo eseguiamo. Fondamentalmente, occorre capovolgere il tubo diverse volte per mettere i beats in sospensione, come mostrato, e si ripeterà questa operazione ogni venti minuti per quattro ore.E questo è praticamente tutto. Ok, quindi questo è il secondo giorno del nostro saggio A b e queste perle sono state appena ricoperte con cellule endoteliali. Quello che vedete qui evidenzia sostanzialmente la differenza tra una perla non ricoperta e una perla ricoperta.A sinistra è chiaramente un microsfera non rivestita. Lo si può capire dalle irregolarità sulla superficie della microsfera. La microsfera rivestita dovrebbe assomigliare a palline da minigolf.Si può notare che si tratta di una distribuzione. Le api sono abbastanza uniformi. In realtà non si dovrebbero vedere api senza rivestimento.Potreste, potreste vedere uno o due esemplari come quello proprio lì, ma nella maggior parte dei casi, direi il 99% di essi, dovrebbero essere rivestiti. Quindi queste sono le api che si considerano in un incubatore durante la notte. Quello che farò è trasferire il mezzo, che contiene alcune larve, in un tubo conico da 50 ml.Quindi laverò la FLA per rimuovere gli eccessi di terreno che si sono attaccati al fondo della PLA e trasferirò anche questi nel tubo conico. I microsferini tendono ad attaccarsi alla flaz. Pertanto, prenderò altri cinque millilitri di EGM due o di terreno per lavare via questi microsferini attaccati.Ora trasferirò queste perle di lavaggio nel tubo conico. Dopo aver trasferito il mezzo con le perle nel tubo conico, le perle si depositano sul fondo del tubo in un paio di minuti circa. È difficile da vedere, ma c'è uno strato sottile di perle sul fondo anche di questo.Ora procederò ad aspirare il vecchio mezzo. Ok, ora laverò le perle con un millilitro di e GM due e poi le trasferirò in una provetta Fendor. Quello che sto facendo in questo momento è lavare le perle e bisogna essere molto, molto accurati perché le perle sono molto fragili.Quindi è necessario agitare a una velocità molto bassa. Proceda semplicemente in questo modo. Tuttavia, lo strato di perline è davvero difficile da vedere.Datelo un paio di minuti e tutte le perle si depositeranno sul fondo. Ora quello che farò è aspirare il vecchio mezzo e lavarlo con un altro millilitro di EGM-2. E dovrete ripetere questo passaggio tre volte.Non si desidera aspirare tutto il mezzo; un livello come questo va bene. Quindi, ancora una volta, è necessario pipettare su e gi&ugrave; molto lentamente. Questo processo richiede di lavorare rapidamente, perch&eacute; prelever&ograve; con una pipetta 10 microlitri della nostra soluzione di perline e li trasferir&ograve; sul coperchio di una camera di conta, per determinare il numero di perline e ottenere una concentrazione di perline per millilitro.I globuli si depositano rapidamente sul fondo dei due. Pertanto, è necessario lavorare velocemente. Li preleverò dal mezzo dorato.E ancora, dovrai lavorare molto velocemente. Ho anche i miei pipetti già pronti, per rendere tutto più efficiente. Ora laverò di nuovo le perle, aspirando e dispensando molto lentamente. Va bene?E subito dopo, prendete l'altro pipetta, B 20, aggiungete due gocce da 10 microlitri. Quas su un coprioggetto, come mostrato; ne prendiamo due perché desidero ottenere una media delle gocce bulk. Abbiamo appena trasferito due quas da 10 microlitri della nostra soluzione campione su questo coprioggetto.E questo è un processo mediante il quale quantifichiamo il numero di microsfere nel nostro un millilitro di EGM due. Fondamentalmente, si conta semplicemente il numero di microsfere visibili, e di solito ne prendo due, effettuo il conteggio su due quadranti dell’ematocitometro e calcolo la media dal tubo per ottenere la concentrazione di microsfere per microlitro. Quindi ho contato il numero di microsfere nel nostro tubo ed ho circa mille microsfere.Ho già preparato la mia soluzione di friedgen. Contiene anche una proteina a una concentrazione finale di 0,15 unità per ml. E ho 2,5 ml di friedgen.Questo ci darà un totale di cinque pozzetti, poiché il volume di ciascun pozzetto è di 500 microlitri. Per trasferire le perline nella soluzione di fibrinogeno, preleverò prima del mezzo di coltura. Prenderò circa 500-600 microlitri del nostro fibrinogeno e utilizzerò questa quantità per mescolare e trasferire le perline nel tubo contenente il fibrinogeno.Ora si desidera prelevare circa 500-600 microlitri di fibrinogeno e utilizzarli per mescolare le perle e trasferirle nuovamente nel tubo. Prima di aggiungere il fibrinogeno, tuttavia, è necessario aggiungere prima la trombina. Aggiungere una concentrazione di 0,625 unità per millilitro, inserendola direttamente al centro di ogni pozzetto.Ora potete vedere che ho aggiunto la trombina in ogni pozzetto, posizionandola direttamente al centro. Il prossimo passaggio consisterà nell'aggiunta del fiber engine. Le api, come ricorderete, si sono depositate rapidamente sul fondo del tubo.Quindi prenderò la mia L quad fibrosa, ma prima mescolerò le provette in questo modo, giusto per portarle in soluzione in modo che si stacchino dal fondo. Sapete, quando volete aspirarle e rilasciarle lentamente su e giù. Questo è quindi il passaggio più importante del protocollo.Prima di tutto, è necessario assicurarsi di aspirare e dispensare lentamente mentre si aggiunge la fibra al centro e la trombina. Posizionare quindi la punta della pipetta direttamente al centro ed eseguire l'aspirazione e la dispensazione ripetute durante questa operazione. Non si deve assolutamente muovere la piastra, poiché anche un lieve movimento potrebbe causare l'agglomerazione delle perle al centro della pozzetta.Si desidera una distribuzione uniforme. Distribuire su e giù più volte in questo modo, molto lentamente, in modo da non creare bolle. Le bolle possono effettivamente ostacolare la visibilità del gel.Quindi si desidera essere il più lenti possibile e non muovere la piastra, cambiando ogni volta la punta della pipetta quando si aggiunge la fibra nei pozzetti. Lasciamo solidificare questi coaguli per cinque minuti. Dopo cinque minuti trasferiremo questa piastra nell'incubatrice a 37 gradi, per altri 10-15 minuti.Sono passati cinque minuti. La fibra ha formato il coagulo. Di solito do solo un'occhiata rapida per verificare se i microsfera siano distribuiti uniformemente e passo da pozzetto a pozzetto; beh, sembri in ottime condizioni.Circa, direi, 200 perle per pozzetto; in media, si desidera un numero compreso tra 200 e 250. Ora inserirò questo nel bagno termostatato a 37 gradi e lo incuberò per circa 10-15 minuti. Questi sono i blasti lunghi che stiamo utilizzando per la co-coltura con le nostre IC nel saggio beat.Questo è un flacone confluenziale. Si nota che le blass hanno una morfologia molto diversa rispetto alle beck. Sono più sottili e appaiono quasi come filamenti.Ciò che facciamo è fondamentalmente agitare questo flacone, raccogliere i blastocisti polmonari e distribuirne 20.000 per pozzetto. Ho appena agitato i blastocisti e li ho sospesi a una concentrazione di un milione di cellule per millilitro, ovvero mille cellule per microlitro. Ora li aggiungerò alla piastra.Ho appena prelevato la nostra piastra dall'incubatore. Sono passati da 10 a 15 minuti e il fibrinogeno ha formato un coagulo completo. Ora aggiungerò un millilitro di EGM due in ogni pozzetto, facendolo goccia a goccia, perché se si aggiunge l'EGM due troppo velocemente in ciascun pozzetto, si potrebbe strappare il gel.Quindi, fondamentalmente, si esegue un movimento lento e graduale da una pozzetta all'altra. Ho appena isolato i blastociti e li ho contati, sospedendoli generalmente a una concentrazione di un milione di cellule per millilitro o mille cellule per microlitro. Ora preleverò 20 microlitri e li aggiungerò a ciascuna pozzetta.E mentre lo fai, devi cambiare sempre la punta della pipetta. Prendi un altro quarto dei fire blasts e aggiungi direttamente i fire blasts al centro del pozzetto. E ancora, cambio la punta ogni volta che aggiungo fire blasts.Ho appena aggiunto i blastocisti sul gel di fibrina. I blastocisti si trovano in un mezzo di coltura GM2. Il gel contiene le microsfere rivestite e si possono effettivamente vedere alcune microsfere mettendo a fuoco il piano.Dopo un paio di giorni, i blasti fibroblastici prolifereranno infine e migreranno, formando un monolayer sul gel di fibrina. Un paio di giorni dopo, circa al terzo o quarto giorno, inizierete a osservare una buona emissione di nuovi germogli dalle perle. Ho appena terminato di eseguire il saggio delle perle in fibrina e, per riassumere, quello che abbiamo fatto è stato rivestire cellule endoteliali su perle, incorporare queste perle in gel di fibrina e quindi sovrapporre uno strato di queste cellule sui gel.Nel corso dei successivi tre o quattro giorni, abbiamo iniziato a osservare delle belle germogliazioni provenienti da queste perline. Quello che apprezzo particolarmente di questi protocolli video è che i fruitori possono effettivamente visualizzare questi passaggi, che in realtà non possono essere adeguatamente trasmessi attraverso un protocollo scritto. Pertanto, spero che ciò che i fruitori vedranno in questi video sia sufficiente a permetter loro di eseguire con successo il fi BTA SC nel proprio laboratorio.

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Questo video mostra un saggio modificato basato su microsfere di vettore che incorpora periciti per studiare la germinazione endoteliale durante le prime fasi dell'angiogenesi. Il test fornisce un modello sperimentale in vitro per comprendere i meccanismi molecolari dell'angiogenesi e l'effetto delle terapie anti-angiogenetiche.

Saggio di germinazione di perline per la valutazione dell'angiogenesi in fase iniziale: un modello in vitro basato su perline per studiare la germinazione endoteliale in presenza di periciti

La microscopia time-lapse e le tecniche di elaborazione delle immagini sono state utilizzate per osservare e analizzare la compattazione del gel mediata da fibroblasti e il riallineamento della fibra di fibrina in un bioreattore controllato dall'ambiente per un periodo di 48 ore.

Osservazione e quantificazione della compattazione del gel di fibrina mediata da fibroblasti

La ricapitolazione del microambiente organo-specifico, che stimola l'angiogenesi locale, è indispensabile per il successo della rigenerazione dei tessuti danneggiati. Questo rapporto dimostra un nuovo metodo per impiantare gel di fibrina sulla superficie polmonare di topo vivente al fine di esplorare come il microambiente polmonare specifico modula l'angiogenesi e la rigenerazione alveolare nel topo adulto.

L&#39;impianto di fibrina gel sul mouse polmone per studiare angiogenesi Lung-specifica

Le cellule tumorali vengono incorporate in un gel di collagene e poi inserite in un gel di fibrina acellulare per generare un sistema di coltura 3D in cui l'invasività e la formazione di tumori satelliti possono essere monitorate.

Three-Dimensional Cultura Assay per esplorare Cancer Cell invasività e formazione di tumori Satellite

Vi presentiamo un protocollo per studiare le interazioni umane endoteliali-periciti in mouse utilizzando una variazione del saggio spina angiogenesi gel matrice.

Studio in vivo di Human Interaction endoteliale-pericyte Utilizzando la matrice di gel Plug Assay nel topo

Questa presenta protocollo una perlina di romanzo in vitro test che più modelli in modo appropriato il processo di in vivo l'angiogenesi di germogliatura incorporando i periciti. Questa modifica consente il dosaggio di perlina di ricapitolare più fedelmente le interazioni cellulari eterotipiche tra cellule endoteliali e cellule murale che sono critiche per l'angiogenesi.

Incorporare i periciti un tallone di cellule endoteliali Assay di germogliatura

Qui, presentiamo un protocollo per studiare la fisiopatologia della retinopatia diabetica proliferativa utilizzando tessuti paziente-derivato, chirurgicamente asportato, fibrovascolare per coltura di tessuto nativo tridimensionale caratterizzazione ed ex vivo. Questo ex vivo modello di cultura è inoltre favorevole per il test o lo sviluppo di nuovi trattamenti.

Un modello di coltura del tessuto Ex Vivo per fibrovascolare complicazioni nella retinopatia diabetica proliferativa

Questo metodo descrive la coltura delle cellule endoteliali derivate da iPSC come 40 micronavi 3D perfuse in una piattaforma microfluidica standardizzata. Questa piattaforma consente lo studio della germogliazione angiogenica basata su gradienti in 3D, tra cui l'anastomosis e la stabilizzazione dei germogli angiogenici in modo scalabile e ad alta produttività.

Analisi standardizzata e scalabile per studiare la germogliazione angiogenica 3D perfusa di cellule endoteliali derivate da iPSC in Vitro

Lo scopo di questo metodo è quello di ottenere matrici 3D derivate dal fibroblasto come scaffold naturale per i successivi saggi cellulari. I fibroblasti vengono semiizzati in una piastra di coltura pretrattata e stimolati con acido ascorbico per la generazione di matrici. Le matrici vengono decellularizzate e bloccate alle cellule rilevanti di coltura (ad esempio, cellule endoteliali).

Sistema a matrice 3D derivato da fibroblasti applicabile al saggio di formazione di tubi endoteliali

Il metodo qui presentato può valutare l'effetto dei reagenti sull'angiogenesi o sulla permeabilità vascolare in vivo senza colorazione. Il metodo utilizza l'iniezione di destrano-FITC attraverso la vena caudale per visualizzare i neovasi o le perdite vascolari.

Saggio modificato in vivo del gel plug della matrice per gli studi sull'angiogenesi

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Ottimizzato fibrina Gel Bead Assay per lo studio della angiogenesi

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