Name: Cronico Salmonella Modello mouse infetti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Scopri come stabilire un modello murino di infezione cronica da Salmonella typhimurium per studiare la colonizzazione intestinale persistente. Questo metodo consente di analizzare le interazioni ospite-patogeno nel tempo.

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Questo lavoro è stato sostenuto dal KO1 NIDDK DK075386 concessione e l&#39;American Cancer Society RSG-09-075-01-MBC a giugno Dom

Questo protocollo comprende tre parti: rilevamento di coltura batterica, gavage mouse e Salmonella. 1. Salmonella condizione di crescita. <ol><li> Preparare la Salmonella brodo Luria-Bertani (LB) piastra, incubare a 37 ° C durante la notte. </li><li> Scegli un clone dalla piastra LB e mettere in 7 ml di LB in una provetta da 12 ml, e si agita a 37 ° C per circa 5 ore. </li><li> Inoculare 50 LB ml con 0,05 ml di una cultura fase stazionaria e incubare a 37 ° C senza agitazione per circa 18 ore. </li><li> Spin coltura batterica durante la notte a temperatura ambiente con 6000 rpm per 10 minuti, sospendere i batteri in HBSS con rapporto di 100:3 (LB: HBSS). Per esempio: Ogni cultura LB 50 ml saranno sospesi in 1,5 ml HBSS. </li><li> Per la sonda gastrica animale, diluire ulteriormente la coltura batterica in rapporto 1:10. Per esempio: Ogni 1,5 ml di coltura LB saranno sospesi in 15 ml HBSS. </li></ol> 2. Salmonella infezione modello *. <ol><li> Preparare la soluzione di streptomicina. Ogni mouse sarà dato 7,5 mg di streptomicina in 100 microlitri HBSS. Per esempio, preparare totale 90 mg di streptomicina in 1,2 ml di HBSS per 10 topi. Hanno sempre qualche volume in più quando si prepara la soluzione di streptomicina. </li><li> Prelevare acqua e cibo 4 ore prima della terapia orale sonda gastrica. </li><li> Topi sonda gastrica con streptomicina con 7,5 mg di streptomicina (100 ml di HBSS per topi di controllo). Afferra la pelle sopra la spalla del mouse saldamente con il pollice e il medio, allungare la testa e il collo con il dito indice per fare l'esofago dritto. Diretto la palla-punta dell'ago alimentazione lungo il tetto della bocca e verso il lato destro della parte posteriore della faringe, poi passare delicatamente giù nell'esofago e iniettare i 100 ul di soluzione. Nessuna resistenza deve essere sentito. </li><li> A 20 ore dopo il trattamento streptomicina, acqua e cibo ritirato ancora prima che i topi infettati con batteri. </li><li> Gavage ogni mouse con 100 microlitri di sospensione HBSS o trattati con HBSS sterile (controllo) mediante sonda gastrica. La procedura di sonda gastrica è lo stesso 2.3) topi sonda gastrica con streptomicina. </li></ol> * Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti utilizzando specifici-esenti da organismi patogeni C57BL femmina / 6 topi (Taconic, Hudson, NY) che sono stati 6-7 settimane di età come descritto in precedenza 1. Il protocollo è stato approvato dalla University of Rochester University commissione per le risorse animali (UCAR). 3. Rilevamento di Salmonella nell'intestino. <ol><li> Raccogliere il mouse fecale (circa 100 mg). </li><li> Trasferimento del campione fecale di un tubo di 1,5 micro centrifuga con 1 ml di PBS e agitare vigorosamente. </li><li> Centrifugare per 10 min a 800 giri al minuto. Trasferire il supernatante in una provetta per microcentrifuga pulita. </li><li> Centrifugazione a 6000 rpm per 5 min. Sopranatante viene scartato e 200 ul PBS viene aggiunto al pellet e in agitazione. </li><li> Streak i 200 microlitri di PBS con una spatola cellulare usa e getta in un piatto BBL CHROMagar per rilevare Salmonella. Salmonella spp appaiono malva (rosa al viola, vedi Fig.1). Se 200 microlitri rendimenti troppe colonie sulla piastra, utilizzare 100 ul o 50 microlitri per la striscia. </li></ol> 4. Rappresentante dei risultati. Quando il protocollo è fatto correttamente, Salmonella typhimurium colonizzazione può essere rilevato nell'intestino del mouse di oltre 6 mesi. Salmonella potrebbe essere rilevato dalla cultura fecali oltre 6 mesi (Fig.1). Come venire fuori tipico di questo modello, perdita di peso del corpo e la morte si verificano entro 4 settimane dopo l'infezione. A seconda del ceppi di Salmonella usati per l'infezione, alcuni topi potrebbe non sopravvivere più di 6 mesi. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Salmonella intestinale nella specie Salmonella appaiono malva (rosa al viola) a colori, a causa delle differenze metaboliche, in presenza di cromogeni selezionati. Altri batteri sono o inibiti o producono colonie blu-verde o incolore. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Proporzioni sopravvivenza dei topi infettati con il ceppo mutante di Salmonella PhoP c, c PhoP Avra-e PhoP AvrA-/AvrA + c, c PhoP Avra per 4 settimane (28 giorni). Tabella 1. Il peso corporeo dei topi infettati da salmonella per 4 settimane. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 settimana </td><td> 2 settimane </td><td> 3 settimane </td><td> 4 settimane </td></tr><tr><td> controllo </td><td> 16,78 ± 1,05 </td><td> 16,91 ± 1,28 </td><td> 18,26 ± 1,23 </td><td> 19,31 ± 1,26 </td><td> 20,26 ± 1,15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16,89 ± 1,03 <td> 17,14 ± 1,19 </td><td> 17,43 ± 1,63 * </td><td> 18,68 ± 1,78 </td><td> 20,05 ± 1,11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16,91 ± 1,12 </td><td> 16,96 ± 1,39 </td><td> 17,06 ± 2,14 ** </td><td> 18,71 ± 2,18 </td><td> 20,15 ± 1,56 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> 16,94 ± 0,96 </td><td> 17,17 ± 1,02 </td><td> 17,63 ± 1,42 * </td><td> 18,44 ± 2,03 </td><td> 20,09 ± 1,17 </td></tr></tbody></table> * Rispetto al gruppo di controllo p &lt;0,05 ** Rispetto al gruppo di controllo p &lt;0,01 Tabella 2. Ceppi di Salmonella utilizzato in questo studio. <table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Descrizione </td><td> Riferimento o fonte </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> Wild-type S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> Non patogeni regolatore complesso mutante </td><td> Miller et al., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra-mutazione </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP c Avra-Avra completato con codifica plasmide </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Per utilizzare questo sistema, è necessario che il ricercatore per imparare a sonda gastrica degli animali. Noi dettaglio una metodologia per preparare la cultura batterica e sonda gastrica i topi. Mostriamo anche come monitorare la persistenza Salmonella nel tratto gastrointestinale (GI). Le fasi critiche in questo protocollo, tra cui: <ol><li> Streptomicina-pretrattamento: Streptomicina-pretrattamento riusciva a liberarsi di qualche commensale della flora intestinale e fanno i topi suscettibili alla infez...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Brodo Luria-Bertani</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Ago per alimentazione</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomicina</td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Spargitori cellulari monouso</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

cronico salmonella modello mouse infetti

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Il modello di infezione batterica del mouse è un sistema potente modello per lo studio di aree come infezioni, infiammazioni, immunologia, trasduzione del segnale, e tumorigenesi. Molti ricercatori hanno approfittato della colite indotta da<em&gt; Salmonella</emTyphimurium&gt; per gli studi sulla fase precoce di infiammazione e infezione. Tuttavia, solo pochi studi sono l&#39;infezione cronica<em&gt; In vivo</em&gt;. I topi con<em&gt; Salmonella</emEsistenza&gt; persistente nel tratto gastrointestinale ci permettono di esplorare a lungo termine di interazione ospite-batterico, trasduzione del segnale, e tumorigenesi. Abbiamo stabilito un modello batterica cronica del mouse infettati con<em&gt; Salmonella</em&gt; Colonizzazione typhimurium nell&#39;intestino del mouse di oltre 6 mesi. Per utilizzare questo sistema, è necessario che il ricercatore per imparare a preparare la coltura batterica e sonda gastrica degli animali. Noi dettaglio una metodologia per la preparazione coltura batterica e topi sonda gastrica. Mostriamo anche come rilevare la<em&gt; Salmonella</emPersistenza&gt; nel tratto gastrointestinale. Nel complesso, questo protocollo sarà di aiuto ricercatori che utilizzano il modello di infezione batterica del mouse per affrontare le questioni biologiche e microbiologiche di fondamentale importanza.

Stabilire un modello batterica cronica del mouse infettati con persistente<em&gt; Salmonella</em&gt; Colonizzazione typhimurium nell&#39;intestino per 27 settimane.

Cronico Salmonella Modello mouse infetti

Il modello di topo infettato da batteri è un potente sistema modello per lo studio di ambiti quali l'infezione, l'infiammazione, l'immunologia, la trasduzione del segnale e...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di stabilire un modello murino infetto cronico da salmonella. Questo viene raggiunto innanzitutto preparando una soluzione di salmonella. Il secondo passaggio della procedura consiste nel somministrare per sondino ai topi streptomicina, seguita da salmonella, oppure soltanto streptomicina.Il terzo passaggio della procedura consiste nell'isolare il salmonella dalle feci di topo e nel rilevare l'infezione da salmonella nell'intestino del topo utilizzando piastre cromogeniche BL. L'ultimo passaggio della procedura è osservare e registrare la massa corporea del topo e annotare i cambiamenti nella vitalità successivi all'infezione da salmonella. In definitiva, si possono ottenere risultati che dimostrano come un'infezione da salmonella possa essere stabilita nell'intestino di topi trattati con salmonella mediante gavaggio.Ciao, sono Michelle P del laboratorio del Dottor Johnson del Dipartimento di Medicina dell'Università di Rochester. Sono anche del Laboratorio Sun e sono Y del Laboratorio Sun. Oggi vi mostreremo un procedimento per stabilire un modello di massa infetta da Alytic Lennar.Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per studiare la trasduzione del segnale nell'interazione tra batteri ospite e la genesi tumorale. Cominciamo. Prima dell'esperimento, preparare un numero sufficiente di piastre con brodo luria, berti o LB per ciascun ceppo di salmonella e da utilizzare durante tutto l'esperimento.Le piastre possono essere refrigerate e conservate per diversi mesi. Successivamente, preparare la coltura di salmonella. Rimuovere una provetta di salmonella congelata a meno 80 gradi Celsius e lasciarla scongelare sul banco per la semina della salmonella su fiamma.Passare una pipetta in un becco Bunsen e immergerla nella coltura batterica scongelata. Tracciare un percorso a zigzag avanti e indietro nella parte superiore del terzo della piastra LB. Passare nuovamente la pipetta alla fiamma e ruotare la piastra.Tracciare un percorso a zigzag con l’ansa per attraversare le strisciate precedenti e distribuire i batteri sui due terzi successivi della piastra. Ripetere ancora una volta. Rigenerare l’ansa alla fiamma.Non permettere al filo di penetrare nell'agar. Lasciare crescere le colonie riponendo le piastre in un incubatore a 37 gradi Celsius per tutta la notte. Se eseguito correttamente, la piastra di salmonella dovrebbe produrre colonie singole in almeno una sezione.Il giorno successivo. Selezionare una colonia dalla piastra LB utilizzando un bastoncino sterile o un'ansa batteriologica e trasferirla in sette millilitri di LB contenuti in un tubo da 12 millilitri. Incubare il tubo a 37 gradi Celsius sotto agitazione per circa cinque ore.Utilizzare 0,05 millilitri di questa coltura per inoculare 50 millilitri di LB in un tubo Falcon. Incubare a 37 gradi Celsius senza agitazione per circa 18 ore.Centrifugare la coltura batterica da 50 millilitri, coltivata tutta la notte, a temperatura ambiente a 5.000 giri al minuto per 10 minuti e scartare il soprannatante. Successivamente, aggiungere 1,5 millilitri di soluzione salina tampone di Hank o HBSS al tubo per risospendere i batteri, in un rapporto di 100 parti di LB a tre parti di HBSS. Portare quindi il volume totale a 15 millilitri con HBSS o in un rapporto uno a dieci di LB rispetto a HBSS.Ogni topo richiede 100 microlitri di cultura diluita di salmonella, ovvero da uno per 10 alla sesta a uno per 10 alla ottava unità formanti colonie, prima di iniziare il prelievo per sondino gastrico, privando i topi di acqua e cibo quattro ore prima dell'esperimento. Preparare quindi una soluzione di streptomicina immediatamente prima del sondino gastrico diluendo 7,5 milligrammi di streptomicina in polvere in 100 microlitri di HBSS. Per ogni topo da iniettare, assicurarsi di preparare un volume aggiuntivo per compensare le perdite prima del sondino gastrico.Preparare innanzitutto un ago da somministrazione con 100 microlitri di soluzione di streptomicina. Rimuovere il primo topo dalla gabbia per effettuare la gavaggio e tenere il topo rivolto verso il piano del bancone. Afferrare saldamente la pelle sopra la spalla del topo con il pollice e il dito medio, distendendo la testa e il collo con l'indice per rendere l'esofago dritto.Indirizzare la punta a sfera dell'ago di alimentazione lungo il palato e verso il lato destro della parte posteriore della faringe. Quindi farlo scendere delicatamente nell'esofago e iniettare i 100 microlitri di soluzione di streptomicina. Non si dovrebbe avvertire alcuna resistenza.Ripetere questo processo per tutti i topi sperimentali e di controllo sottoposti a sperimentazione. Circa 20 ore dopo lo strp de m e la somministrazione per gavaggio, e quattro ore prima della somministrazione per gavaggio di salmonella, rimuovere acqua e cibo dai topi che riceveranno salmonella per gavaggio per via orale. Somministrare per gavaggio a ciascun topo nello stesso modo di prima, utilizzando 100 microlitri di soluzione di salmonella in HBSS.Dopo la gavaggio, trasferire ogni topo in una nuova gabbia per iniziare la raccolta delle feci. A partire da circa otto ore dopo il gavaggio, rimuovere immediatamente le feci dalla gabbia non appena espulse. Raccogliere 100 milligrammi di materiale fecale di topo come campione sperimentale.Raccogliere i campioni quotidianamente o settimanalmente, a seconda della durata dello studio, per l'analisi di Salmonella nelle feci. Trasferire il campione fecale in una provetta microcentrifuga da 1,5 millilitro contenente un millilitro di PBS ed eseguire un'energica vortexazione, quindi centrifugare per 10 minuti a 800 RPM. Trasferire il soprannatante in una provetta pulita da 1,5 millilitro e centrifugare a 6.000 RPM per cinque minuti.Eliminare il soprannatante e aggiungere 200 microlitri di PBS ai pellet, quindi vortexare per risospendere. Successivamente, rilevare il *Salmonella* mediante una piastra BB l roag. Utilizzare da 10 a 100 microlitri di soluzione di materiale fecale per piastra, spargendola sulla piastra come mostrato nella sezione due.Le specie di salmonella appaiono di colore mar a causa delle differenze metaboliche in presenza di cromogeni selezionati. Contare le colonie di salmonella sulla piastra per confrontare il livello di infezione tra topi singoli. In questa procedura sperimentale abbiamo utilizzato topi femmine C 57 black six liberi da patogeni specifici, di età compresa tra sei e sette settimane.I topi sono stati infettati con salmonella e streptomicina più HBSS. I topi sono stati sottoposti a gavaggio controllato con streptomicina soltanto. I ceppi di salmonella utilizzati includono il ceppo selvatico di salmonella typhimurium, ATCC 1 4 0 2 8 S FP C, un ceppo mutante non patogeno di salmonella e tre ceppi FPC del laboratorio del dottor James Madera che portano il gene virulenza-associato AAV R age in PSKW 29, un plasmide a bassa copia. Utilizzando questo protocollo, la colonizzazione da salmonella tyrian può essere rilevata nell'intestino del topo.L'infezione cronica da salmonella è stata misurata analizzando le feci; sono stati raccolti campioni di peso corporeo e di tessuto intestinale per la colorazione immunofluorescente. Tipicamente, la perdita di peso corporeo e la morte si verificano entro quattro settimane dal contagio. Qui sono mostrate le proporzioni di sopravvivenza a quattro settimane dal contagio.Una volta che i topi sopravvivono per quattro settimane dopo l'infezione, aumentano di peso corporeo e la frequenza di decessi diminuisce nelle successive 23 settimane. Nel complesso, oltre il 65% dei topi infettati con ceppi di salmonella, FSY fsy, A VRA nullo o fsy. A VRA eterozigote sopravvive oltre sei mesi con infezione persistente da salmonella nell'intestino.Dopo l'infezione acuta, i sopravvissuti continuavano a essere portatori di salmonella, che poteva essere rilevata sei mesi dopo l'infezione mediante il metodo descritto in questo protocollo. L'analisi di immunofluorescenza di campioni di tessuto provenienti dall'intestino di topo mostra l'invasione della salmonella nella mucosa intestinale a 27 settimane dall'infezione. In questa immagine, i nuclei sono colorati in blu e le cellule infettate da salmonella sono mostrate in verde.Come mostrato nel gruppo di controllo, non è presente una colorazione verde brillante, il che indica l'assenza di colonizzazione da salmonella. Al contrario, nei topi infettati da salmonella a 27 settimane dall'infezione, si osserva una colorazione verde brillante nella mucosa intestinale. Questo dimostra la persistenza dell'infezione da salmonella nel topo pretrattato con streptomicina.Abbiamo appena mostrato come indurre un'infezione cronica in alcuni modelli murini. Quando si esegue questa procedura, è importante ricordarsi di preparare frescamente una coltura per il garage, delle corrette competenze nel garage e di rilevare la presenza di ANA per assicurarsi che il modello sperimentale funzioni. È tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Fonte: Lo, B.C., et al. Fibrosi intestinale indotta da Salmonella cronica. J. Vis. Esp. (2019)Il video dimostra la quantificazione del carico batterico in un modello murino di infezione cronica da Salmonella typhimurium resistente alla streptomicina. Dopo l'eutanasia e la dissezione sterile, i tessuti cecali e splenici vengono prelevati, omogeneizzati con perle d'acciaio per rilasciare batteri e diluiti in serie di teste. Le diluizioni vengono placcate su agar selettivo e le colonie visibili...

Quantificazione del carico batterico tissutale in un modello murino di infezione intestinale cronica

Fonte: Lenhard, A., et al. Un modello murino per la transizione di Streptococcus pneumoniae da colonizzatore a patogeno dopo la co-infezione virale riproduce la malattia aggravata dall'età. J. Vis. Esp. (2022)Questo video mostra l'elaborazione dei polmoni da un topo co-infettato da un batterio patogeno e un virus. La trituratura, omogeneizzazione e placcatura del tessuto polmonare permettono di quantificare il carico batterico, indicando la diffusione batterica ai polmoni e la gravità della...

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Questo protocollo descrive l'induzione della sepsi monobatterica Gram-negativa in un sistema di modelli murini. Il modello è utile per studiare le risposte infiammatorie e letali dell'ospite durante la sepsi.

Caratterizzazione della peritonite settica indotta da Salmonella Typhimurium nei topi

Questo articolo descrive un nuovo modello murino per la transizione dello pneumococco da colonizzatore asintomatico a patogeno che causa malattie durante l'infezione virale. Questo modello può essere facilmente adattato per studiare le interazioni polimicrobiche e ospite-patogeno durante le diverse fasi della progressione della malattia e tra vari ospiti.

Un modello murino per la transizione di Streptococcus pneumoniae da colonizzatore a patogeno in seguito a co-infezione virale ricapitola la malattia esacerbata dall'età

Scopri come stabilire un modello murino di infezione cronica da Salmonella typhimurium per studiare la colonizzazione intestinale persistente. Questo metodo consente di analizzare le interazioni ospite-patogeno nel tempo.

Cronico Salmonella Modello mouse infetti

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