Name: Modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare Sutura della arteria cerebrale media nel ratto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-05T17:15:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: Impara la tecnica di occlusione endovascolare dell'arteria cerebrale media nel ratto per studiare l'ischemia cerebrale focale. Questo modello animale consente di indurre infarti permanenti o transitori e valutare le strategie terapeutiche per l'ictus.

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Ringraziamo Beth Rauch e l&#39;Università del Wisconsin Piccoli Fondo Imaging degli animali per la risonanza magnetica. Il Dipartimento di Neurochirurgia presso l&#39;Università del Wisconsin-Madison ha finanziato questo lavoro.

MCAO Rat Modello Preparativi prechirurgica Una tecnica asettica deve essere utilizzato per tutte le procedure chirurgiche sopravvivenza. Disinfettare la superficie di lavoro con disinfettante chirurgico commerciali e preparare confezioni sterili di strumenti chirurgici, tendaggi, garze, tamponi, suture e lame di bisturi in autoclave. Una mascherina chirurgica, cofano capelli e guanti sterili devono essere indossati. Un Germinator secco tallone sterilizzatore è anche usato per sterilizzare gli strumenti chirurgici tra le procedure di se ambulatori topo più sarà fatto durante una sessione. Preriscaldare un acqua con camicia coperta homeothermic e posto sotto un tampone assorbente in modo da prevenire l'ipotermia del ratto durante l'intervento chirurgico. <ol><li> Luogo ratto spontaneamente iperteso (o ceppo ratto altro mezzo a scelta) in una camera di induzione e di indurre l'anestesia con il 5% isoflurano (macchina per anestesia deve essere impostato a 1,0 L / min O 2 e 1,0 L / min N 2 O). Inferiore al 1-2% isoflurano per mantenere l'anestesia. </li><li> Applicare Artificial Tears unguento in entrambi gli occhi. </li><li> Radersi la gola e regione del collo sinistro al di là del sito di incisione prospettico con tagliaunghie (Oster A5 con lama # 10). </li><li> Applicare Betadine a una garza e disinfettare la pelle partendo dal centro della regione chirurgici, a spirale verso l'esterno. Risciacquare con garza sterile contenente etanolo al 70%, passando pad in un modello simile. Ripetere i due passaggi per un totale di tre cicli. </li><li> Iniettare 0,2 ml di bupivacaina 0,5% per via sottocutanea lungo il sito di incisione futuri. </li><li> Ratto posto in stockinette sterile o coprire con una garza sterile chirurgico. </li></ol> Occlusione transitoria di MCA <ol start="7"><li> Sotto un microscopio operatorio, una incisione mediana ventrale viene eseguita e la fascia superficiale è sezionato. </li><li> Sotto la fascia superficiale, non c'è tessuto ghiandolare ai muscoli a sinistra e tre che formano un triangolo: la sterno, che si trova sulla linea mediana della trachea, il digastrico (facilmente identificabile con le sue lucide parte bianca tendinee) e, infine, il muscolo sternocleidomastoideo. </li><li> Attenta dissezione tagliente e smussa viene effettuata all'interno del triangolo di identificare l'arteria carotidea (esclusivo dissezione può essere preferito da alcuni per minimizzare i danni accidentali dei tessuti). Le arterie esterni, interni e carotide comune (ECA, ICA, CCA) sono esposti. L'arteria carotide è grande e visibilmente impulsi. Il nervo vago è visto che scorre lungo la superficie laterale di entrambe le arterie carotide comune e interna, ed è nettamente sezionato fuori dal comune e arterie della carotide interna. </li><li> Due rami della Corte dei conti sono poi sezionati nettamente, il primo ramo voce medialmente e il secondo ramo voce lateralmente. Entrambi i rami sono cauterizzato e tagliate, che consente una maggiore facilità nel mobilitare le navi più grandi. </li><li> L'ECA è ora sezionato più rostralmente. L'osso ioide si possono incontrare e questo limiterà l'estensione della dissezione rostrale. L'arteria carotide esterna è legato fuori come distalmente possibile con una sutura di seta 6-0. </li><li> Un altro 6-0 sutura seta è posto liberamente intorno alla Corte dei conti nei pressi della biforcazione con la ICA. Fare attenzione a non occludere il vaso, come la sutura intraluminale da utilizzare per l'occlusione andranno di qui a un passaggio successivo. </li><li> Clip microchirurgia sono posti sulle arterie carotide comune e interna vicino alla biforcazione. </li><li> Un arteriotomia iniziale parziale si crea tra i due cravatte di seta di sutura sulla carotide esterna. </li><li> Introdurre un 2,2 -3,0 cm di lunghezza di sutura 4-0 nylon monofilo, con un 2,0 cm kink dalla sua arrotondati, siliconato punta, nel lume della Corte dei conti verso il CCA in cui si trova la clip microchirurgico. Questi punti di sutura sono disponibili in commercio (Doccol Corp., Redlands, California, USA). Tagliate la parte restante della Corte dei conti (presso il sito del arteriotomia parziale) per liberare il tronco e la posizione del moncone di sotto della biforcazione della Corte dei conti e ICA, questo sarà più facilmente permettere la sutura intraluminale di scivolare nella ICA. </li><li> Stringere la sutura di seta intorno al ceppo della Corte dei conti per assicurare la sutura intraluminale nylon e prevenire le emorragie, e quindi rimuovere la clip microvascolare dalla ICA. Aprire il clip prima di rimuoverla per controllare il sanguinamento. </li><li> Continuare ad avanzare la sutura di nylon dalla Corte dei conti a lume di ICA l'arteria cerebrale media (MCA). Questa lunghezza è tipicamente 18-20 mm ed è la ragione per l'immissione una piegatura nella sutura prima dell'inserimento. Dopo un intervallo variabile della sutura in nylon è inserita, la resistenza può essere sentito. Se questo si verifica con gran parte della sutura in nylon ancora presenti al di fuori della nave, indica che la sutura è probabile che entrano l'arteria pterigopalatina (vedi nota sotto). Tirare indietro la sutura e la curva un po 'di proseguire lungo la ICA, che si svolgerà più medialmente. Inoltre, la dissezione delle origini della PPA può essere fatto per visualizzare meglio il percorsodel filamento intraluminale. Continuare a inserire la sutura in nylon fino ad avvertire resistenza durante e dopo la posizione di 2 centimetri piegato. A questo punto, la sutura intraluminale ha bloccato l'origine del MCA. MCA occlusione può essere confermato attraverso il monitoraggio della riduzione del flusso ematico cerebrale regionale mediante un misuratore laser Doppler (vedi tabella Materiali per una sorgente attrezzature). Si noti inoltre che l'origine dell'arteria pterigopalatina off della ICA può essere direttamente legato al largo, se si preferisce, al fine di evitare l'intubazione accidentale di questa nave con la sutura intraluminale. </li><li> Avviare il timer e occlusione tempo di record di avvio. </li><li> Rimuovere il microclip dal CCA. </li><li> Chiudere l'incisione (derma, pannicolo carnosus, strati di tessuto sottocutaneo) rapidamente con 3-0 sutura seta (un semplice modello continuo faciliterà la riapertura di riperfusione) e con attenzione luogo il topo in una gabbia di recupero. Controllare che il pavimento della gabbia intorno al naso e la bocca sono privi di lettiera e di recupero monitor da anestesia. </li></ol> Ripristino del flusso sanguigno MCA (riperfusione) <ol start="21"><li> Poco prima del periodo di occlusione dovrebbe terminare, ri-anestetizzare il topo, disinfettare il sito di incisione con Betadine e il 70% di etanolo (3 cicli, come prima) e riaprire l'incisione, eliminando i punti di sutura di chiusura. </li><li> Posizionare un microclip sul CCA, come prima. </li><li> Ritirare la sutura occlude parzialmente dalla ICA, fino alla fine sutura è visibile attraverso l'ICA. NON rimuovere completamente la sutura dalla ICA / Corte dei conti! </li><li> Posizionare un microclip sul ICA sopra l'estremità della sutura intraluminale. </li><li> Rimuovere completamente la sutura occlusione e strettamente legare il moncherino della Corte dei conti. Fine record di occlusione (inizio riperfusione) tempo. </li><li> Rimuovere il microclip dalla ICA. </li><li> Rimuovere il microclip dal CCA. </li><li> Inumidire la regione con alcune gocce di soluzione fisiologica sterile e chiudere gli strati incisione (derma, pannicolo carnosus, tessuto sottocutaneo) con 3-0 sutura in seta con un semplice schema interrotto. </li><li> Somministrare 0,05 mg / kg buprenorfina (o altro adeguato analgesico post-operatorio dopo le vostre linee guida istituzionali) nello spazio peritoneale. </li><li> Preriscaldata iniettare 5 cc di soluzione fisiologica per via intraperitoneale. Ciò fornirà l'idratazione durante la fase di recupero. </li><li> Monitorare il recupero di ratto dall'anestesia. </li><li> Dopo il ratto ha recuperato, test per l'indicazione del comportamento di infarto tenendo il topo per la coda e osservando se il topo può girare su entrambi i lati. Leggendo solo da una parte ci si aspetta. Scale di punteggio semplice può essere usato per registrare iniziale post-infartuale funzionamento Behavorial (vedi Discussione). </li><li> Ulteriori iniezioni di buprenorfina (dosaggio come sopra) dovrebbe essere data ogni 6 a 8 ore per 24 ore di sollievo dal dolore. Estendere l'analgesia se l'animale sta mostrando segni di disagio. </li></ol> Rappresentante Risultati <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Occlusione dell'arteria cerebrale media di sutura endovascolare. Uno schema semplificato del sistema circolatorio craniale del ratto è mostrato con un siliconato sutura intraluminale occludere l'origine della MCA. L'OA e rami ST off della Corte dei conti sinistra sono stati legati e un pareggio sutura intorno al ceppo della Corte dei conti tiene la sutura intraluminale in posizione. ACA, dell'arteria cerebrale anteriore, BA, arteria basilare; CCA, arteria carotide comune, della Corte dei conti, arteria carotide esterna, ICA, arteria carotide interna, MCA, arteria cerebrale media, OA, arteria occipitale; PCA, cerebrale posteriore; PComA, comunicante posteriore arteria, PPA, arteria pterigopalatina, ST, arteria tiroidea superiore. Figura adattata da Sasaki et al. 4 e Lee 3. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Rappresentante di imaging a risonanza magnetica di sezioni coronali di cervello di ratto 24 ore dopo 1 ora MCAO transitori. Edema cerebrale che accompagnano l'ischemia focale viene visualizzato nelle immagini MRI pesata in T2. La zona dell'infarto appare iperintensa (chiaro) sulle immagini T2. Modelli di infarto simile può essere visto con tecniche più avanzate come la risonanza magnetica per immagini pesata in diffusione e coefficiente di diffusione apparente mappatura 5. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Rappresentante sezioni coronali di cervello di ratto colorati con TTC 24 ore dopo 1 ora MCAO transitori. Colorazione TTC rivela bianco (senza macchia) infartuata regioni della corteccia cerebrale e striato nel ratto come quello mostrato nella Figura 2. Si noti che il modello generale di lesioni focali ischemiche è simile a quello visto nel MRI-T2 pesate, anche se l'area infartuale finale definito istologicamente può essere leggermente più piccola della lesione T2.

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Gli autori non hanno conflitti di interesse a divulgare. Questo protocollo è stato approvato dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso presso l&#39;Università del Wisconsin-Madison School of Medicine e la sanità pubblica e si attiene alle linee guida dell&#39;Istituto Nazionale di Sanità per l&#39;uso di animali da esperimento.

Modelli di roditori di ischemia cerebrale possono essere classificati come globale o focale e come reversibili o irreversibili. Usiamo un modello di ischemia reversibile focale al fine di imitare il danno da riperfusione che possono verificarsi a seguito ricanalizzazione nei pazienti affetti da ictus. Mentre le quote ratto il vantaggio di simili circolazione cranica all&#39;essere umano, la circolazione ampio collaterale intracranica a causa del circolo di Willis e leptomeningeo risultati anastomosi dei volumi infarto incoerente 6. Usiamo il ratto spontaneamente iperteso (SHR) ceppo perché dimensione dell&#39;infarto è maggiore in SHRs esposti ad ischemia cerebrale focale rispetto ai ratti normotesi 7-10. Induzione corsa in SHRs è anche più consistente e può generare meno di mortalità rispetto ad altri ceppi comunemente usati 11. Inoltre, i parametri fisiologici devono essere monitorati per tutta la chirurgia, in quanto le fluttuazioni possono aggiungere alla variabilità dei volumi infarto; questi parametri includono la pressione sanguigna, arteriosa O 2 e CO 2 livelli, ipotermia, e iperglicemia, che può esacerbare danno ischemico 2,12 . L&#39;ipotermia è particolarmente preoccupante perché può ridurre il grado di danno ischemico neuronale, e quindi, ponendo il ratto su una piastra elettrica di termoregolazione durante l&#39;intervento è essenziale. Ci avvaliamo di preparati commercialmente siliconato suture in questa procedura, nel tentativo di aumentare la coerenza nella dimensione infartuale 13-15. Tradizionalmente, le suture intraluminale utilizzato per occludere i MCA sono stati preparati da fiamma arrotondamento una punta di 3-0 sutura in nylon o utilizzando una pistola per colla a caldo cappotto la punta di sutura con una colla piccola biglia 16. Queste procedure di produrre punti di sutura con diametri variabili punta e, quindi, potrebbe richiedere diversi tentativi di occlusione prima di trovare una sutura che corrisponde al diametro del vaso di un topo dato. Ulteriori variazioni sul metodo MCAO descritto in questo video includono occlusione più distale, risparmiando i rami lenticulostriate in modo da avere un puro infarto corticale 17, e l&#39;occlusione simultanea del MCA e ipsilaterale carotide comune per ridurre il flusso di sangue collaterali 6,9. Gli effetti funzionali di ictus può essere valutato utilizzando una varietà di test comportamentali, in cui si riflettono i deficit in compiti specifici in una scala di punteggio semplice. Per esempio, Bederson et al. 18 ha sviluppato una classificazione neurologica ratti punteggio sul grado di flessione degli arti anteriori in una posizione corporea elevata, la resistenza asimmetrica per una spinta laterale e il comportamento in campo aperto cerchio. I ratti si estende sia arti anteriori al pavimento quando elevata e non presentano alcun deficit di altri sono stati classificati &quot;Normale (0)&quot;, mentre i ratti con controlaterale flessione degli arti anteriori solo sono stati classificati con &quot;deficit moderati (1)&quot;. &quot;Gravi grado 2&quot; ratti visualizzata la resistenza è diminuita dal lato controlaterale ad una forza laterale e &quot;gravi di grado 3&quot; ratti inoltre impegnati in cerchio comportamenti. Deficit comportamentali di grado inferiore sono sempre stati osservati nel grado superiore (ad esempio, di grado 2 e 3, gli animali anche visualizzato flessione degli arti anteriori) e questi punteggi sono risultati predittivi delle differenze nella dimensione infartuale 18. Così, ad esempio un sistema di punteggio semplice consente una rapida e coerente la valutazione semi-quantitativa del deficit funzionali da ictus. Misurare l&#39;entità di infarto cerebrale è comunemente realizzato dalla colorazione istologica di danno tissutale utilizzando TTC, violetto cresolo (Nissl macchia) o ematossilina ed eosina. Tecniche di imaging a risonanza magnetica, inclusa la diffusione RM pesata per visualizzare l&#39;infarto in momenti subito dopo l&#39;occlusione, consentono la determinazione di un volume di infarto in ogni singolo ratto, senza la necessità per la raccolta dei tessuti. Ciò è particolarmente prezioso in studi volti a determinare l&#39;efficacia di un trattamento neuroprotettivo dopo ictus; immagini del ratto dopo MCAO ma la somministrazione trattamento prima dà la fiducia investigatore che tutti gli animali sperimentali e di controllo esperto colpi simili per iniziare, riducendo gli effetti confondenti di variabilità nell&#39;induzione ictus.

<table><tbody><tr><td> Sutura in nylon 4-0</td><td>Doccol Corporation</td><td></td><td>lunghezza del rivestimento in silicone di 2-3 mm, diametro della punta di 0,39 mm</td></tr><tr><td>Ratti spontaneamente ipertesi</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>290-300 g, maschi</td></tr><tr><td>Pompa e tappetini termoregolatori Gaymar T/Pump</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unità elettrochirurgica bipolare Vetroson V-10</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore a perle di vetro Germinator 500</td><td>CellPoint Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monitor di perfusione sanguigna Vasamedics Bpm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;Laserflo</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare sutura della arteria cerebrale media nel ratto

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

L&#39;ictus è la principale causa di disabilità e la terza causa di morte negli adulti in tutto il mondo 1. In corsa umana, esiste una condizione clinica altamente variabile, per lo sviluppo di modelli animali di ischemia focale, tuttavia, raggiungere la riproducibilità del volume di infarto sperimentalmente indotto è essenziale. Il ratto è un modello animale ampiamente utilizzato per l&#39;ictus a causa della sua relativamente bassi costi di animali di allevamento e alla somiglianza della sua circolazione cranica a quella degli esseri umani 2,3. Negli esseri umani, l&#39;arteria cerebrale media (MCA) è più comunemente colpiti nelle sindromi ictus e diversi metodi di MCA occlusione (MCAO) sono state descritte per imitare questa sindrome clinica in modelli animali. Perché ricanalizzazione si verifica comunemente a seguito di un ictus acuto nell&#39;uomo, riperfusione dopo un periodo di occlusione è stato incluso in molti di questi modelli. In questo video, dimostriamo il transitorio endovascolare modello sutura MCAO nel ratto spontaneamente iperteso (SHR). Un filamento con un rivestimento in silicone punta è posto intraluminally all&#39;origine MCA per 60 minuti, seguita da riperfusione. Si noti che il periodo di occlusione ottimale può variare in altri ceppi di topo, come Wistar e Sprague-Dawley. Diversi indicatori comportamentali di ictus nei ratti sono mostrati. Ischemia focale la conferma con immagini T2 pesate risonanza magnetica e dalla colorazione sezioni cerebrali con 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) 24 ore dopo MCAO.

Induzione chirurgica del danno ischemico cerebrale nel ratto è un modello ampiamente utilizzato per la ricerca ictus. Qui mostriamo l&#39;induzione di ischemia cerebrale focale da occlusione dell&#39;arteria cerebrale media. Visualizzazione delle infarto risultante dalla colorazione istologica e la risonanza magnetica è anche mostrato.

Modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare Sutura della arteria cerebrale media nel ratto

L'ictus rappresenta la principale causa di disabilità e la terza causa di morte negli adulti a livello mondiale1. Nell'ictus umano, esiste un'elevata variabilità...

In questo video, illustreremo un metodo per indurre un infarto cerebrale mediante occlusione endovascolare dell'arteria cerebrale media nel ratto. Questo è un modello animale ampiamente utilizzato nella ricerca sugli ictus, che provoca ischemia nella corteccia cerebrale così come in strutture sottocorticali, inclusi i gangli della base e l'ipotalamo. Questo modello può indurre un'ischemia cerebrale sia permanente che transitoria.A seconda che la sutura intraluminale venga lasciata in sede o rimossa dopo un periodo di tempo definito. L'ischemia cerebrale produce un core di infarto in cui avviene la morte cellulare e una regione peri-ischemica detta penombra, in cui è possibile un certo recupero cellulare. Prima di iniziare, prendiamoci un momento per descrivere i passaggi che seguiremo.Qui vediamo un diagramma semplificato del sistema circolatorio cranico del ratto. In questo intervento chirurgico, esporremo l'arteria carotide sinistra in prossimità della biforcazione dell'arteria carotide comune, o CCA, nell'arteria carotide esterna, la ECA, e nell'arteria carotide interna, la ICA. Due piccoli rami della ECA, l'arteria occipitale e l'arteria tiroidea superiore, verranno legati mediante coagulazione bipolare e la ECA verrà occlusa distalmente rispetto a questi due rami. Utilizzando un filo di seta, verranno posizionate clip microvascolari sull'arteria carotide comune e sull'arteria carotide interna.Un filo di sutura in monofilamento di nylon con una punta rivestita in silicone verrà quindi inserito attraverso un'incisione nell'arteria carotide esterna (ECA) e guidato verso l'alto nell'arteria carotide interna (ICA). Questo filo intraluminale viene legato delicatamente in posizione con un filo di seta attorno all'ECA prima di rilasciare la clip microchirurgica dall'ICA. Il filo di sutura intraluminale in nylon viene quindi avanzato di circa due centimetri fino a quando la punta in silicone ostruisce l'origine dell'arteria cerebrale media (MCA).Il secondo microclips viene rimosso dall'arteria carotide comune (CCA) e viene cronometrato il periodo di occlusione. Ora che abbiamo esaminato brevemente la procedura, passiamo all'intervento chirurgico. Preparare il ratto come si farebbe per qualsiasi procedura chirurgica seguendo le linee guida per la cura degli animali della propria istituzione; si induce l'anestesia nel ratto utilizzando isoflurano al 5% con un flusso di un litro al minuto di ossigeno e un litro al minuto di protossido di azoto, quindi si riduce la concentrazione di isoflurano all'1-2% per il mantenimento dell'anestesia.Una volta raggiunto il piano anestetico, applichiamo un unguento oftalmico artificiale su entrambi gli occhi e raschiamo il collo con un rasoio elettrico. La zona viene quindi disinfettata con soluzione di betadina seguita da etanolo al 70%. Questo processo deve essere ripetuto per un totale di tre cicli di sciacqui con Betadina ed etanolo al 70%.Il neonato viene posizionato in un calzino sterile e adagiato su una coperta termoregolatrice. Per prevenire l'ipotermia. È utile sollevare leggermente il collo inserendo un tubo conico da 15 ml sotto la testa del neonato.Questo agevolerà l'esposizione delle arterie carotidee in un secondo momento. Infine, vengono iniettati sottocute 0,2 ml di una soluzione al 0,5% di bupivacaina lungo il sito d'incisione previsto, al fine di garantire un sollievo dal dolore postoperatorio sotto un microscopio operatorio. Eseguire un'incisione mediana utilizzando una lama di bisturi n. 10.La dissezione rimanente verrà eseguita sul lato sinistro dell'animale rispetto alla linea mediana. Iniziare a dissezionare attraverso la fascia superficiale. Questa operazione viene effettuata utilizzando una combinazione di dissezione ottusa e affilata.Del tessuto ghiandolare esteso è visibile lateralmente, mentre il grande muscolo sternoioideo si trova sulla linea mediana. Utilizzare applicatori con estremità di cotone per dissezionare la ghiandola lateralmente e il muscolo sternoioideo medialmente. Sotto il tessuto ghiandolare, si osserveranno i muscoli digastrico e sternocleidomastoideo, che insieme al muscolo sternoioideo sulla linea mediana formano un triangolo muscolare sottile il cui apice è cerchiato.È all'interno di questo triangolo che la dissezione proseguirà fino all'arteria carotidea. Utilizzare forbici microchirurgiche per tagliare la fascia che ricopre i muscoli. Questo permetterà la retrazione dei muscoli per esporre i vasi sottostanti.Gli applicatori con punta di cotone possono essere utilizzati per retrarre i muscoli e mettere in vista le arterie comuni, esterne, profonde ed interne. Proseguire l'esposizione dell'arteria carotide esterna lungo i suoi rami, il che richiederà una dissezione precisa e accurata dei vasi.L'obiettivo di questi passaggi è liberare l'arteria carotide esterna (ECA) e l'arteria carotide interna (ICA) dal tessuto connettivo sottostante. Continuare a dissezionare l'ECA in senso longitudinale. Si noti che potrebbe presentarsi l'osso dell'arcata zigomatica (HI) e ciò limiterà l'estensione della dissezione in direzione rostrale.Il nervo vago, che appare bianco, si osserva decorrere lungo l'aspetto laterale delle arterie carotide comune e carotide interna, ed è stato dissezionato con precisione dalla CCA e dalla ICA. Anche due rami provenienti dall'ECA sono stati dissecati con precisione. Il primo ramo diretto lateralmente è l'arteria occipitale e il secondo ramo diretto medialmente è l'arteria tiroidea superiore.Entrambi i primi due rami dell'ECA vengono cauterizzati e successivamente recisi. Il taglio di questi rami consente una maggiore facilità nel mobilizzare i vasi. Più avanti nella procedura, utilizzando un punto di sutura in seta, legare saldamente l'ECA il più distalmente possibile.Posizionare un altro punto di sutura in seta in modo lento attorno all'ECA a monte della biforcazione dell'arteria carotide comune. Assicurarsi di non ostruire il vaso con questo legamento, poiché il filo endovascolare utilizzato per l'occlusione dell'arteria cerebrale media passerà attraverso questa porzione dell'ECA; posizionare clip microvascolari sia sull'arteria carotide comune che sull'arteria carotide interna.Questa posizione è leggermente distante rispetto all'origine dell'ECA. Successivamente, creare una arterotomia parziale tra i due legami di sutura in seta dell'ECA. Una piccola quantità di sangue residuo potrebbe fuoriuscire, ma un'emorragia abbondante indica probabilmente un posizionamento errato delle clip microvascolari.In questo caso, accertarsi che nessun tessuto sottostante sia stato intrappolato tra le lame della clip, impedendone la chiusura completa. Il passaggio successivo consiste nell'inserire un tratto di tre centimetri di sutura in nylon monofilamento nell'ECA. È utile segnare la sutura a due centimetri dalla sua punta rivestita di silicone.Questi fili di sutura sono disponibili in commercio e il diametro della punta e la lunghezza del rivestimento in silicone possono essere personalizzati secondo le proprie specifiche, in base all'età e al peso dei ratti che si utilizzeranno. Per ratti del peso di 300 grammi, utilizziamo un diametro della punta di 0,39 millimetri e una lunghezza del rivestimento in silicone di due-tre millimetri su un filo di nylon da quattro ottavi. Introdurre il filo di sutura in nylon occlusivo nel lume dell'arteria carotide esterna dirigendolo verso l'arteria carotide comune.Stringere il punto di sutura in seta intorno al moncone dell'ECA per fissare la sutura intraluminale in nylon ed evitare emorragie. Recidere la porzione residua dell'ECA per liberare il moncone e posizionare il moncone dell'ECA al di sotto del punto di biforcazione in modo che risulti approssimativamente allineato con l'arteria carotide interna. Ciò consentirà più facilmente lo scorrimento della sutura intraluminale all'interno dell'arteria carotide interna.Rimuovere la clip microvascolare dall'ICA. Ricordare di aprire lentamente le clip per verificare la presenza di sanguinamento prima di rimuoverle completamente. Continuare ad avanzare il filo di nylon all'interno del lume dell'ICA fino a quando non raggiunge l'arteria cerebrale media.Questa lunghezza è tipicamente di circa due centimetri ed è la ragione per cui si applica un segno sul filo di sutura prima dell'inserimento. Dopo aver inserito una lunghezza variabile di filo di sutura in nylon, si può avvertire una resistenza; se tale resistenza si verifica quando gran parte del filo di sutura in nylon è ancora esterna al vaso, è probabile che il filo stia entrando nell'arteria tegoplatina. In questo caso, ritirare leggermente il filo e curvarlo appena per proseguire lungo l'arteria carotide interna, che prosegue in modo più diretto.Osservare il cambiamento di posizione del filo di sutura all'interno della luce della carotide interna in queste due immagini di confronto. Procedere spingendo il filo di sutura attraverso la carotide interna fino a quando la maggior parte del filo è inserita e si avverte nuovamente resistenza in corrispondenza di questo punto. Il filo intraluminale ha ostruito l'origine dell'arteria cerebrale media.Avviare il cronometro e registrare l'occlusione. Tempo di inizio. Rimuovere l'altro clip microvascolare dalla CCA, chiudere rapidamente e con cura l'incisione.Posizionare il ratto in una gabbia di recupero. Verificare che il fondo della gabbia intorno al naso e alla bocca sia privo di materiale di lettiera poco prima che termini il periodo di occlusione, anestetizzare il ratto e riaprire l'incisione rimuovendo i punti di sutura. Applicare una microclip sulla ACF come in precedenza.Estrarre parzialmente il punto di legatura occlusivo dalla CIA fino a quando l'estremità del filo non diventa visibile attraverso la CIA. Non rimuovere ancora completamente il filo. Tuttavia, posizionare un'altra clip microscopica sulla CIA al di sopra del punto in cui si trova il filo intraluminale, rimuovere completamente il punto di legatura occlusivo e legare il moncone della ECA.Registrare l'ora di inizio della riperfusione. Rimuovere le microclip dall'ICA e dalla CCA inumidendole nella regione con alcune gocce di soluzione salina sterile e chiudere l'incisione con punti di sutura. Somministriamo buprenorfina a un dosaggio di 0,05 milligrammi per chilogrammo di peso corporeo per un'ulteriore analgesia postoperatoria.Amministriamo anche cinque mililitri di soluzione salina per via intraperitoneale per garantire l'idratazione durante la fase di recupero. Dopo che il ratto si è ripreso dall'anestesia, verificare la presenza di segni comportamentali di infarto sollevando il ratto per la coda e osservando se riesce a ruotare su entrambi i lati nel test di oscillazione corporea elevata, poiché ci si aspetta che si pieghi solo verso un lato. I ratti che presentano sintomi di ictus possono anche girare in cerchio verso un solo lato durante i movimenti in campo aperto.Qui mostriamo i risultati di 60 minuti di occlusione dell'arteria cerebrale media in ratti spontaneamente ipertesi. L'immagine di risonanza magnetica è stata eseguita 24 ore dopo l'occlusione dell'arteria cerebrale media e sono mostrate immagini pesate in T2. Questo ratto ha sviluppato un ampio infarto che coinvolge sia le regioni corticali sia quelle striatali.L'area iperintensa sulla risonanza magnetica è evidenziata in giallo, anche se qui non mostriamo i risultati. Le aree infartuate visualizzate mediante risonanza magnetica possono essere ulteriormente analizzate mediante imaging pesato in diffusione e mappe del coefficiente di diffusione apparente. Le regioni infartuate vengono inoltre confermate mediante colorazione istologica di sezioni cerebrali fresche con cloruro di triifenil tetrazolio, o TTC; la deidrogenasi nel tessuto vitale converte il substrato in un colorante rosso insolubile.Pertanto, le regioni infartuate rimangono non colorate e appaiono bianche. Si noti che le dimensioni dell'infarto possono essere influenzate da diversi fattori, tra cui la ceppa del ratto e le dimensioni dell'animale. Utilizziamo ratti spontaneamente ipertensivi poiché producono dimensioni di infarto più costanti rispetto ad altre ceppi comunemente utilizzate, come i ratti frogg, dolly o wistar.È inoltre importante standardizzare un peso target del ratto per ridurre le variazioni nel diametro dei vasi e, di conseguenza, nell'efficacia risultante dell'occlusione della MCAA. Speriamo che questo video si sia rivelato utile per eseguire la tecnica di occlusione della MCA nel vostro laboratorio. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Dimostriamo nel video un metodo per produrre una occlusione dell'arteria cerebrale media in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Mostriamo anche come valutare il grado di infarto cerebrale da 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione.

Modello murino di Mezzo occlusione dell&#39;arteria cerebrale

Questo video mostra la procedura di esecuzione dell'occlusione permanente dell'arteria cerebrale media distale, o MCAO, con l'arteria carotide comune, o legatura CCA, nei ratti anziani per modellare l'ictus ischemico. Questo blocca il flusso sanguigno al cervello, portando alla morte neuronale e generando un modello per studiare i meccanismi dell'ictus e i potenziali trattamenti.

Indurre l'ischemia attraverso l'occlusione dell'arteria carotide media e comune in un modello di ratto

Fonte: Larpthaveesarp, A., et. al. Modello transitorio di occlusione dell'arteria cerebrale media di ictus neonatale nei ratti P10. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra l'istituzione del modello di occlusione dell'arteria cerebrale media in un cucciolo di ratto. L'arteria carotide interna (ICA) è esposta e una legatura è fissata per limitare il flusso di sangue. Un occlude viene inserito attraverso l'ICA per raggiungere l'arteria cerebrale media. Il cucciolo viene quindi lasciato riprendersi...

Generazione di un'occlusione dell'arteria cerebrale media in un cucciolo di ratto per indurre l'ischemia cerebrale locale

Descriviamo un metodo altamente riproducibile per l'occlusione permanente di un roditore grande vaso sanguigno cerebrale. Questa tecnica può essere realizzato con pochissima danni periferici, minima perdita di sangue, un elevato tasso di sopravvivenza a lungo termine, e volume dell'infarto coerente commisurato alla popolazione clinica umana.

Cerebrale permanente occlusione di vasi<em&gt; Via</em&gt; Doppio Legatura e resezione

Qui vi presentiamo un protocollo per la produzione di distale occlusione dell'arteria cerebrale media permanente anziani ratti femmina con occlusione simultanea delle arterie carotidi a generare grandi infarti corticali e deficit sostenuti. Mostriamo conferma della dimensione della lesione utilizzando la risonanza magnetica strutturale a 24 ore e 8 settimane dopo l'ictus.

Esecuzione permanente distale Medio cerebrale con arteria carotide comune di occlusione in ratti anziani per studiare corticale Ischemia con disabilità sostenuta

Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

Un modello murino di ischemia-riperfusione cerebrale è istituito per studiare la patofisiologia del colpo. Abbiamo distalmente legare l'arteria cerebrale centrale di destra e l'arteria carotica comune di destra e ripristinare il flusso sanguigno dopo 10 o 40 min di ischemia.

Occlusione del vaso due Mouse modello di Ischemia-riperfusione cerebrale

Questo protocollo descrive il modello di ischemia cerebrale focale transitoria nei topi attraverso l'occlusione intraluminale dell'arteria cerebrale media. Inoltre, vengono mostrati esempi di valutazione dei risultati utilizzando la risonanza magnetica per immagini e test comportamentali.

Modello transitorio di occlusione dell'arteria cerebrale media dell'ictus

Il protocollo attuale descrive un modello di ratto di occlusione/riperfusione dell'arteria cerebrale media che preserva la struttura anatomica dei vasi cerebrali senza causare danni.

Un modello di ratto di occlusione/riperfusione dell'arteria cerebrale media senza danneggiare la struttura anatomica dei vasi cerebrali

I modelli in vivo di ratto sono strumenti indispensabili per studiare i meccanismi patologici e i bersagli terapeutici per l'ictus ischemico. Questo lavoro descriverà l'esecuzione della colorazione in immunofluorescenza in fette di cervello infartuate dopo occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) nei ratti.

Valutazione della segnalazione della morte cellulare mediante immunofluorescenza in un modello di ictus ischemico di ratto

L'obiettivo di questo studio era stabilire un metodo riproducibile per eseguire una craniectomia seguita da un'occlusione permanente e selettiva dell'arteria cerebrale media nei ratti, da applicare in studi sperimentali sui deficit di memoria motoria e spaziale.

Occlusione selettiva e permanente dell'arteria cerebrale media nei ratti: un approccio sperimentale per studiare i deficit di memoria motoria e spaziale

Impara la tecnica di occlusione endovascolare dell'arteria cerebrale media nel ratto per studiare l'ischemia cerebrale focale. Questo modello animale consente di indurre infarti permanenti o transitori e valutare le strategie terapeutiche per l'ictus.

Modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare Sutura della arteria cerebrale media nel ratto

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