Name: Trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Impara il trapianto ortotopico aortico nel ratto per studiare la vasculopatia cronica da trapianto. Questo modello PVG-CI permette di analizzare la formazione del neointima e i meccanismi del rigetto.

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Gli autori ringraziano Christiane Pahrmann per il suo lavoro istologico. Finanziamento Sonja Schrepfer ha ricevuto un assegno di ricerca dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 e SCHR992/4-1).]

I ratti del peso di circa 250-300g sono acquistati da Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). I trapianti sono eseguiti utilizzando ratti PVG come donatori, e ratti ACI come destinatari. I ratti sono alloggiati in condizioni convenzionali, alimentati standard di ratto chow e libidum ad acqua. Tutti gli strumenti chirurgici vengono sterilizzati prima dell&#39;uso. Donatore preparazione: Anestetizzare ratto con isoflurano (2,5-3%) con una camera di induzione. <ol><li> Radersi i capelli addominale e toracica e posizionare il ratto sulla sua schiena e posizionare una maschera sul suo naso e la bocca per mantenere l&#39;anestesia. </li><li> Disinfettare la zona addominale e toracica utilizzando ampiamente Provo-Iodio, utilizzare prossimi 80% di etanolo, ripetere questa operazione tre volte. </li><li> Controllare riflessi pizzicare i piedi posteriori per essere sicuri che il topo è sufficiente anesthesized. </li><li> Exsanguinate il ratto aprendo l&#39;addome e il taglio un buco in aorta addominale. </li><li> Aprire delicatamente il torace per trovare l&#39;aorta toracica discendente. </li><li> Sezionare l&#39;aorta toracica dai tessuti circostanti come il grasso, nervi e l&#39;esofago. </li><li> Prelevare un pezzo 1,5 centimetri dell&#39;aorta con un couter, senza danni ai tessuti dell&#39;aorta. </li><li> Profumato l&#39;innesto aortico accuratamente con acqua fredda soluzione salina sterile e conservare l&#39;innesto a 4 ° C. </li></ol> Destinatario: Anestetizzare ratto con isoflurano (2,5-3%) con una camera di induzione. La temperatura corporea è mantenuta durante la procedura chirurgica. <ol><li> Shave zona addominale e applicare una pomata oculare per evitare che gli occhi si secchi durante l&#39;anestesia. </li><li> Posizionare il topo sul dorso e posto una maschera sul suo naso e la bocca per mantenere l&#39;anestesia. </li><li> Disinfettare la zona addominale utilizzando Provo-Iodio, utilizzare prossimi 80% di etanolo, ripetere questa operazione tre volte. </li><li> Controllare riflessi pizzicare i piedi posteriori per essere sicuri che il topo è sufficiente anesthesized. </li><li> Eseguire una incisione addominale mediana che separa la pelle ei muscoli in due fasi per aprire l&#39;addome. </li><li> Posto l&#39;intestino in un guanto salina riscaldata idratata in polvere libera. Piegare il guanto intorno l&#39;intestino per prevenire la perdita di umidità. </li><li> Rimuovere il tessuto adiposo che copre l&#39;aorta addominale. </li><li> Sezionare l&#39;aorta formano la regione infrarenale alla biforcazione, attenzione a non causare danni sui rami dei vasi. </li><li> Se necessario legare i rami dell&#39;aorta. </li><li> In primo luogo usare una pinza microchirurgica da parte infrarenale dell&#39;aorta sezionato per fermare il flusso di sangue. </li><li> Successivamente, inserire un secondo morsetto vicino alla biforcazione dell&#39;aorta. </li><li> Ora che il flusso di sangue si arresta, rimuovere un breve segmento di aorta. </li><li> Prendere l&#39;innesto aortico donatore, che è stato conservato in soluzione salina sterile allo 0,9% sul ghiaccio, per accorciare la lunghezza adeguata e posizionarlo nella fessura. </li><li> Collegare l&#39;aorta donatore al ricevente aorta, eseguendo punti di sutura in esecuzione utilizzando 8-0 prolene sutura (Ethicon, Norderstedt, Germania). Inizia con il cranio end-to-end anastomosi. </li><li> Quando il distale end-to-end anastomosi è finito, aprire con cautela il morsetto distale. </li><li> Quando non c&#39;è sanguinamento dopo l&#39;apertura del morsetto distale, aprire con cautela la pinza del cranio. In caso di sanguinamento in suture, chiudere il morsetto di nuovo, individuare il sanguinamento e fermare l&#39;emorragia utilizzando un unico punto. </li><li> Ci dovrebbe essere un impulso visibile alla fine distale dell&#39;aorta. </li><li> Avanti spostare l&#39;intestino nuovamente dentro l&#39;addome. </li><li> Lavare l&#39;addome preriscaldata con soluzione salina sterile. </li><li> Chiudere lo strato muscolare della parete addominale con suture 6-0 prolene esecuzione (Ethicon, Norderstedt, Germania). </li><li> Utilizzare 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt) in esecuzione suture per chiudere la pelle. </li><li> Mentre il topo è ancora in anestesia, iniettare 4-5mg/kg Carprofen per via sottocutanea. </li><li> Per fornire l&#39;analgesia sufficiente per questo tipo di procedura, metamizol viene aggiunto all&#39;acqua potabile (Metamizol 50 mg per 100 ml) di farmaci antidolorifici per 3 giorni post-trapianto. </li></ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Per vari motivi abbiamo trovato il modello di trapianto ortotopico aortica un modo più preciso per studiare lo sviluppo di TVP rispetto al modello eterotopico trapianto di cuore: Per quanto riguarda la tecnica chirurgica, il modello di trapianto aortica rappresenta un metodo facilmente realizzabile, che richiede esclusivamente la realizzazione di end-to-end-anastomosi, mentre il modello eterotopico trapianto di cuore può essere considerato una sfida più complesso e soggetto ad errori abilità del chirurgo s , che ...

<table><tbody><tr><td>Microscopio chirurgico (ingrandimento 25x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Depilatore</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Provo-Iodio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina allo 0,9% fredda con ghiaccio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina sterile allo 0,9% preriscaldata</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unguento oftalmico</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guanto</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici microchirurgiche</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Morsetti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto 8-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto 6-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto 5-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofene</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metamizolo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotton fioc</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Modelli di ricerca di rigetto cronico sono essenziali per studiare i processi fisiopatologici pathobiological e durante lo sviluppo di vasculopatia trapianto (TVP). Il modello animale comunemente utilizzati per gli studi cardiovascolari rigetto cronico è il modello eterotopico trapianto di cuore eseguito in roditori di laboratorio. Questo modello è ampiamente utilizzato negli esperimenti dal Ono e Lindsey (3) ha pubblicato la propria tecnica. Per analizzare i risultati nei vasi sanguigni, il cuore deve essere sezionato e tutte le navi devono essere misurate. Un altro metodo per indagare il rigetto cronico nel interrogativi cardiovascolare è il modello di trapianto aortica (1, 2). Nel modello di trapianto ortotopico aortica, l&#39;aorta può essere facilmente valutati istologicamente (2). Il modello PVG-to-ACI è particolarmente utile per gli studi CAV, dal rigetto acuto vascolare non è uno dei principali fattori di confondimento e ciclosporina A (CsA) il trattamento non impedisce lo sviluppo della CAV, simile a quello che troviamo in ambito clinico (4 ). A7-giorni di CsA è richiesto in questo modello per prevenire il rigetto acuto e di raggiungere sopravvivenza a lungo termine con lo sviluppo di TVP. Questo modello può essere utilizzato anche per studiare rigetto cellulare acuto e necrosi dei media nei modelli xenogeniche (5).

Questo video dimostra il modello di trapianto ortotopico aortica come un semplice modello per studiare lo sviluppo di vasculopatia trapianto (TVP) nei ratti.

Trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica

I modelli di ricerca sul rigetto cronico sono essenziali per indagare i processi patobiologici e patofisiologici durante lo sviluppo del trapianto...

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un modello accurato e un metodo facilmente realizzabile per studiare lo sviluppo della vasculopatia da trapianto. Questo viene ottenuto utilizzando la combinazione di ceppi PVG e CI. Il secondo passaggio della procedura consiste nel prelevare l'aorta del donatore.Il terzo passaggio della procedura consiste nel preparare il ricevente. L'ultimo passaggio della procedura è l'anastomosi dell'aorta del donatore con l'aorta del ricevente. Alla fine, è possibile ottenere risultati che mostrano la formazione di neo-intima mediante istopatologia.Ciao, sono Sonya Schwefel, professoressa di immunologia dei trapianti presso il Thet Eye Lab del Centro Cardiaco Universitario di Amburgo, Germania. E io sono Manish Duboff, anch'io del TS Eye Lab.Il mio laboratorio si interessa di immunologia dei trapianti. In questo video vi presenteremo il modello di trapianto aortico ortotopico, un modello semplice e valido per studiare lo sviluppo della vasculopatia da trapianto nei topi. Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per indagare il rigetto cronico nelle patologie cardiovascolari.Nel modello di trapianto ortotopico dell'aorta, l'aorta può essere facilmente valutata istologicamente. Inoltre, il modello da PVG a CI è particolarmente utile per lo studio della vasculopatia da trapianto. Poiché il rigetto vascolare acuto non rappresenta un fattore confondente rilevante e lo sviluppo della vasculopatia è simile ai reperti osservati in ambito clinico.Iniziamo. Il donatore utilizzato nel trapianto ortotopico dell'aorta è un ratto PVG del peso di circa 250-300 grammi. Dopo aver anestetizzato l'animale, rasare i peli dell'addome e del torace.Posizionare il ratto in posizione supina e applicare una maschera facciale sul naso e sulla bocca. Per mantenere l'anestesia, disinfettare ampiamente la zona addominale e toracica utilizzando iodio Provo, seguito da etanolo al 80%. Successivamente, verificare i riflessi dell'animale pizzicando le zampe posteriori.Per confermare che l’anestesia sia sufficiente. Eseguire l’esanguinamento del ratto aprendo l’addome e praticando un foro nell’aorta addominale. Aprire con attenzione il torace per individuare l’aorta toracica discendente.Dissezionare l'aorta toracica dai tessuti circostanti, come grasso, nervi e esofago. Prelevare un pezzo di aorta lungo 1,5 centimetri utilizzando strumenti acuti senza danneggiare il tessuto aortico. Perfundere l'innesto aortico accuratamente con soluzione salina fredda e conservare l'innesto a quattro gradi Celsius.Il ricevente per questo trapianto ortotopico di aorta è un ratto A CI del peso di circa 250-300 grammi. Per iniziare questa procedura, rasare l'area addominale del ratto anestetizzato e applicare un unguento oculare per prevenire l'essiccamento degli occhi durante l'anestesia. Posizionare il ratto in posizione supina e applicare una maschera facciale sul naso e sulla bocca per mantenere l'anestesia.Successivamente, disinfettare la zona addominale utilizzando iodio povidone, seguito da etanolo al 80%. Dopo aver pizzicato le zampe posteriori per confermare che il ratto sia sufficientemente anestetizzato, aprire l'addome praticando un'incisione addominale mediana e separando la pelle e il muscolo. Due passaggi.Una volta aperto l'addome, posizionare gli intestini nel guanto inumidito con soluzione salina. Piegare il guanto attorno agli intestini per prevenire la perdita di umidità. Rimuovere il tessuto adiposo che ricopre l'aorta addominale.Dissezionare l'aorta dalla regione infrarenale fino alla biforcazione, avendo cura di non danneggiare i rami dei vasi. Se necessario, legare i rami dell'aorta dopo aver dissezionato l'aorta. In primo luogo, utilizzare una pinza microchirurgica sulla porzione infrarenale dell'aorta per interrompere il flusso sanguigno.Posizionare successivamente una seconda pinza vicino alla biforcazione dell'aorta. Ora che il flusso sanguigno è stato interrotto, rimuovere un breve segmento dell'aorta. Prendere quindi la graft aortica del donatore che è stata conservata in soluzione salina 0,9% sul ghiaccio.Accorciarla alla lunghezza appropriata e posizionarla nel difetto dell'aorta. Collegare l'aorta del donatore all'aorta del ricevente eseguendo suture continue in prolene otto-zero, iniziando dall'anastomosi estremità-estremità craniale. Al termine dell'anastomosi estremità-estremità distale, aprire con attenzione il clamp distale.Successivamente, aprire con attenzione il morsetto cranico. Dovrebbe essere visibile un polso all'estremit&agrave; distale dell'aorta. Ora riposizionare gli intestini all'interno dell'addome e lavare l'addome con soluzione salina sterile preriscaldata.Chiudere lo strato muscolare della parete addominale utilizzando punti di sutura in prolene 6-0 continui. Successivamente, utilizzare punti di sutura in prolene 5-0 continui per chiudere la cute mentre il ratto è ancora sotto anestesia. Iniettare da quattro a cinque milligrammi per chilogrammo di carprofene per via sottocutanea.Rimettere l'animale nella sua gabbia. Aggiungere metimazolo all'acqua da bere come terapia antidolorifica per tre giorni. Dopo il trapianto.I risultati di istopatologia dopo 120 giorni saranno mostrati al nostro microscopio di istologia. Le immagini mostreranno chiaramente lo sviluppo della vasculopatia da trapianto. Il restringimento luminale sviluppato sarà evidenziato mediante animazione al computer.È stato appena mostrato come eseguire un trapianto aortico auto-topic in ratti. È stata inoltre dimostrata con successo lo sviluppo di vasculopatia da trapianto dopo 120 giorni mediante istopatologia. Questo metodo consente l'indagine degli effetti iniziali di farmaci sulla vasculopatia cronica dell'allograft.

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