Trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di stabilire un modello accurato e un metodo facilmente realizzabile per studiare lo sviluppo della vasculopatia da trapianto. Questo viene ottenuto utilizzando la combinazione di ceppi PVG e CI. Il secondo passaggio della procedura consiste nel prelevare l'aorta del donatore.

Il terzo passaggio della procedura consiste nel preparare il ricevente. L'ultimo passaggio della procedura è l'anastomosi dell'aorta del donatore con l'aorta del ricevente. Alla fine, è possibile ottenere risultati che mostrano la formazione di neo-intima mediante istopatologia.

Ciao, sono Sonya Schwefel, professoressa di immunologia dei trapianti presso il Thet Eye Lab del Centro Cardiaco Universitario di Amburgo, Germania. E io sono Manish Duboff. Anch'io del TS Eye Lab.

Il mio laboratorio si interessa di immunologia dei trapianti. In questo video vi presenteremo il modello di trapianto aortico ortotopico, un modello semplice e valido per lo studio dello sviluppo della vasculopatia da trapianto in Wes. Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per indagare il rigetto cronico nelle patologie cardiovascolari.

Nel modello di trapianto ortotopico dell'aorta, l'aorta può essere facilmente valutata dal punto di vista istologico. Inoltre, il modello da PVG a CI è particolarmente utile per lo studio della vasculopatia da trapianto, poiché il rigetto vascolare acuto non rappresenta un fattore confondente rilevante e lo sviluppo della vasculopatia è simile ai reperti osservati in ambito clinico.

Iniziamo. Il donatore utilizzato nel trapianto ortotopico dell'aorta è un ratto PVG del peso di circa 250-300 grammi. Dopo aver anestetizzato l'animale, rimuovere i peli dell'addome e del torace.

Posizionare il ratto in posizione supina e applicare una maschera facciale sul naso e sulla bocca. Per mantenere l'anestesia, disinfettare ampiamente la zona addominale e toracica utilizzando iodio Provo, seguito da etanolo al 80%. Successivamente, verificare i riflessi dell'animale pizzicando le zampe posteriori.

Per confermare che l’anestesia sia sufficiente. Eseguire l’esanguinamento del ratto aprendo l’addome e praticando un foro nell’aorta addominale. Aprire con attenzione il torace per individuare l’aorta toracica discendente.

Dissezionare l'aorta toracica dai tessuti circostanti, come grasso, nervi ed esofago. Prelevare un segmento di aorta lungo 1,5 centimetri utilizzando forbici atraumatiche, senza provocare danni al tessuto aortico. Perfundere l'innesto aortico abbondantemente con soluzione salina fredda e conservare l'innesto a quattro gradi Celsius.

Il ricevente per questo trapianto aortico ortotopico è un ratto A CI del peso di circa 250-300 grammi. Per iniziare questa procedura, rasare l'area addominale del ratto anestetizzato e applicare un unguento oculare per prevenire l'essiccamento degli occhi durante l'anestesia. Posizionare il ratto in posizione supina e applicare una maschera facciale sul naso e sulla bocca per mantenere l'anestesia.

Successivamente, disinfettare la zona addominale utilizzando iodio povidone, seguito da etanolo al 80%. Dopo aver pizzicato le zampe posteriori per confermare che il ratto sia sufficientemente anestetizzato, aprire l'addome praticando un'incisione addominale mediana e separando la pelle e il muscolo. Due passaggi.

Una volta aperto l'addome, posizionare gli intestini nel guanto bagnato con soluzione fisiologica. Piegare il guanto attorno agli intestini per prevenire la perdita di umidità. Rimuovere il tessuto adiposo che ricopre l'aorta addominale.

Dissezionare l'aorta dalla regione infrarenale fino alla biforcazione, avendo cura di non danneggiare i rami dei vasi. Se necessario, legare i rami dell'aorta dopo aver dissezionato l'aorta. In primo luogo, utilizzare una pinza microchirurgica sulla porzione infrarenale dell'aorta per arrestare il flusso sanguigno.

Posizionare successivamente una seconda pinza vicino alla biforcazione dell'aorta. Ora che il flusso sanguigno è stato arrestato, rimuovere un breve segmento dell'aorta. Prendere quindi la graft aortica del donatore che è stata conservata in soluzione salina allo 0,9% su ghiaccio.

Accorciarla alla lunghezza appropriata e posizionarla nel difetto dell'aorta. Collegare l'aorta del donatore all'aorta del ricevente eseguendo suture continue in prolene otto-zero, iniziando dall'anastomosi estremità-estremità craniale. Al termine dell'anastomosi estremità-estremità distale, aprire con attenzione il clamp distale.

Successivamente, aprire con attenzione il morsetto cranico. Dovrebbe essere visibile un polso all'estremità distale dell'aorta. Ora riposizionare l'intestino nell'addome e lavare l'addome con soluzione salina sterile preriscaldata.

Chiudere lo strato muscolare della parete addominale utilizzando punti di sutura in prolene 6-0 continui. Successivamente, utilizzare punti di sutura in prolene 5-0 continui per chiudere la cute mentre il ratto è ancora sotto anestesia. Iniettare da quattro a cinque milligrammi per chilogrammo di carprofene per via sottocutanea.

Rimettere l'animale nella sua gabbia. Aggiungere metimazolo all'acqua da bere come terapia antidolorifica per tre giorni. Dopo il trapianto.

I risultati di istopatologia dopo 120 giorni verranno mostrati al nostro microscopio di istologia. Le immagini mostreranno chiaramente lo sviluppo della vasculopatia da trapianto. L'inspessimento della parete e il restringimento luminale sviluppati saranno evidenziati mediante animazione al computer.

È stato appena mostrato come eseguire un trapianto aortico auto-topic in ratti. È stata inoltre dimostrata con successo lo sviluppo di vasculopatia da trapianto dopo 120 giorni mediante istopatologia. Questo metodo consente l'indagine degli effetti iniziali dei farmaci sulla vasculopatia cronica dell'allograft.