Iniezione ortotopica nel cuscinetto adiposo mammario: stabilire il cancro al seno nei topi

Innanzitutto, stabilire la linea cellulare di carcinoma mammario desiderata in coltura. Il giorno prima dell'operazione, radere l'addome del topo e utilizzare una crema depilatoria per rimuovere il pelo ed esporre i capezzoli inguinali. Il giorno dell'operazione, raccogliere le cellule, anestetizzare il topo e confermare la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi. Usando una pinzetta, pizzica la pelle intorno al capezzolo per creare un tunnel sollevato.

Quindi, con la siringa delle cellule raccolte, forare la pelle. L'ago dovrebbe seguire il tunnel fino a quando la punta non si avvicina al capezzolo. Sposta delicatamente la punta dell'ago verso l'alto nel cuscinetto adiposo mammario, appena sotto il capezzolo. Rimuovere le pinzette per formare una tenda di pelle con l'ago e poi iniettare lentamente le cellule.

Infine, ritrarre la siringa, facendo attenzione a non disturbare la protuberanza rotonda che circonda il capezzolo. Le cellule iniettate e i successivi tumori esprimono luciferasi e possono essere monitorati utilizzando l'imaging bioluminescente. Nel protocollo di esempio, mostreremo l'instaurazione del carcinoma mammario ortotopico murino. Il giorno prima dell'operazione, trattenere manualmente il topo ricevente e girare il lato della pancia dell'animale verso il pelo da radere intorno ai quarti capezzoli.

Pulire il pelo con un sottile strato di crema depilatoria. Utilizzare acqua distillata per rimuovere la crema dopo 30-60 secondi. E asciuga il mouse con carta assorbente morbida. Il giorno dell'operazione, diluire la sospensione di cellule di carcinoma mammario murino a una concentrazione di 2 x 10-5 cellule per millilitro di PBS in una provetta sterile per microcentrifuga su ghiaccio.

Prima di ogni iniezione, caricare una siringa da un millilitro dotata di un ago da 45 x 16, con 50 microlitri di cellule per topo. E confermare una mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi in ogni animale sedato. Applica un unguento sugli occhi degli animali e usa una pinzetta per tendere la pelle attorno al quarto capezzolo del primo topo per creare un tunnel che la siringa deve seguire.

Tenere la siringa con lo smusso rivolto verso l'alto ed entrare per via sottocutanea nella pelle a una distanza compresa tra cinque e 10 millilitri dal capezzolo, seguendo il tunnel fino a quando la punta dell'ago non raggiunge quasi il capezzolo. - L'uso di una pinzetta per tendere la pelle attorno al primo capezzolo crea un tunnel che la siringa deve seguire. L'ago deve essere inserito tra le punte delle pinzette e deve salire, invece di premere nel tessuto. Spostare con cautela la punta dell'ago verso l'alto nel cuscinetto adiposo mammario fino a quando lo smusso non si trova sotto il capezzolo.

E rilascia la tenda cutanea per consentire un'iniezione lenta delle cellule tumorali. - Dopo l'inserimento, spostare con cautela la punta dell'ago verso l'alto nel cuscinetto adiposo mammario fino a quando lo smusso non si trova sotto il capezzolo e si avverte resistenza per garantire la consegna delle cellule nella posizione corretta. Quando tutte le cellule sono state iniettate, ruotare leggermente l'ago di lato e ritrarre lentamente la siringa. Utilizzare un batuffolo di cotone per applicare pressione sulla ferita dell'ago per 10-20 secondi, per assicurarsi che non vi siano infiltrazioni di liquido.

Il capezzolo iniettato dovrebbe apparire come una sfera piatta bianca trasparente, con il capezzolo al centro