Colorazione rosso Nilo di C. elegans: un metodo per visualizzare le goccioline lipidiche negli animali fissi

- Quando si visualizzano le goccioline lipidiche, gli organelli di stoccaggio intracellulare per i lipidi neutri, iniziano aggiungendo al campione una soluzione detergente, come quella contenente Triton X-100. Questo permeabilizzerà le cellule del verme. Quindi, fissare il campione nella concentrazione appropriata di isopropanolo, ad esempio il 40%.

Quindi, aggiungi il rosso del Nilo al campione e proteggilo dalla luce, poiché il colorante è sensibile alla luce. La fissazione consente al colorante di accedere alle goccioline lipidiche in tutto l'animale. Il rosso del Nilo è un colorante lipofilo il cui spettro di emissione della fluorescenza dipende dalla polarità dell'ambiente lipidico locale.

Se esposto a lipidi polari, come i fosfolipidi, lo spettro di emissione del rosso Nilo si trova nelle lunghezze d'onda rosse più elevate. Se esposto a lipidi neutri, come i triacilgliceroli e gli esteri sterolici nel nucleo neutro delle goccioline lipidiche, lo spettro di emissione del rosso Nilo si sposta verso le lunghezze d'onda più basse, quelle giallo-oro.

Pertanto, utilizzare il canale verde di un microscopio a fluorescenza, che raccoglierà le emissioni di lunghezza d'onda giallo-oro,