Saggio della risposta fotomotoria: un metodo per misurare la risposta comportamentale delle larve di pesce zebra a un improvviso cambiamento nelle condizioni di illuminazione

- Per iniziare, trasferisci 10 embrioni di zebrafish, con l'aiuto di una pipetta di trasferimento, in un becher riempito con 20 millilitri di acqua. Ora, fai crescere gli embrioni a 28 gradi Celsius, sotto l'appropriato ciclo di luce e buio richiesto per un esperimento. Quindi, trasferisci le larve in piastre a pozzetti. Assicurati che ogni pozzetto contenga una larva per dare abbastanza spazio per nuotare.

Ora riempi completamente ogni pozzo con acqua. Posizionare la piastra del pozzetto nella camera di registrazione comportamentale e tracciare il movimento larvale utilizzando il software di tracciamento video. Le larve mostrano un aumento del movimento al buio e una diminuzione del movimento alla luce quando esposte a un ciclo anormale di luce e buio a causa dell'aumento dei livelli di stress. Calcolando la differenza tra la distanza media percorsa durante l'ultimo minuto di un periodo iniziale e il primo minuto del periodo successivo ci dice la risposta fotomotoria del pesce.

In questo protocollo, esamineremo la risposta fotomotoria in larve di zebrafish e minnow fathead esposte alla caffeina. Per prima cosa, posizionare la piastra a pozzetti contenente il pesce sperimentale nella camera di registrazione comportamentale. Quindi, apri il protocollo di tracciamento sviluppato in precedenza. Nel visualizzatore di tracciamento video, assicurati che tutte le larve siano visibili, che sia presente una sola larva in ogni pozzetto e che i pozzetti siano allineati con le aree di osservazione definite.

Quindi, fai clic su Esperimento ed esegui. Specificare il nome e la posizione di salvataggio dei dati e fare clic sull'icona Diverse immagini dal vivo per evidenziare tutte le aree di visualizzazione predefinite. Infine, chiudi il pannello della camera di registrazione e fai clic su Sfondo seguito da Avvia sul monitor del computer.