Screening della tossicità chimica basata sugli embrioni: valutazione degli effetti sullo sviluppo di embrioni di zebrafish

- Iniziare aggiungendo 5 embrioni in terreno E3 a ciascun pozzetto di una piastra a 96 pozzetti e rimuovere il terreno in eccesso con una pipetta. Aggiungere un terreno E3 contenente kanamicina in ogni pozzetto per prevenire la contaminazione. Lascia che gli embrioni crescano a 28 gradi Celsius.

Diluire il composto di interesse con un solvente appropriato, come il DMSO, per preparare diverse concentrazioni o dosi e testare l'effetto di ciascuna dose sugli embrioni in via di sviluppo. Una volta che gli embrioni raggiungono lo stadio desiderato, pipettare ogni soluzione madre in pozzetti individuali. Copri il piatto con un coperchio e agitalo delicatamente per amalgamare il contenuto. Lascia che gli embrioni nella piastra a pozzetti crescano a 28 gradi Celsius.

Al momento desiderato nello sviluppo embrionale, posizionare la piastra a pozzetti sotto un microscopio adatto per esaminare il fenotipo degli embrioni. È possibile osservare fenotipi come la perdita degli occhi, la crescita ritardata o la perdita di melanociti negli embrioni in via di sviluppo. Nel seguente protocollo, testeremo una libreria di composti per inibitori di piccole molecole dello sviluppo del prosencefalo.

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