JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 visualizzazioni • 2:52 min • April 30th, 2023
- Per iniziare, fai crescere gli embrioni in 3 piastre di Petri. La prima è una piastra di controllo che contiene la soluzione di Hank, una soluzione salina bilanciata. La seconda e la terza piastra hanno la soluzione di Hank con un composto potenzialmente neurotossico a diverse concentrazioni.
Il composto neurotossico nella soluzione di esposizione penetra nella membrana esterna degli embrioni per diffusione passiva e altera i processi del sistema nervoso come l'attenzione, la coordinazione e l'attività muscolare. Una volta che gli embrioni si sono sviluppati in larve dell'età appropriata, trasferire ogni larva in un pozzetto individuale di una piastra a 48 pozzetti. Tieni traccia delle condizioni di trattamento per ogni animale.
Trasferire la piastra del pozzetto su una piattaforma di registrazione e abbassare il coperchio. Lascia acclimatare le larve per 10 minuti. Imposta cicli alternati di periodi di luce e buio utilizzando il software.
Le larve di pesce zebra normalmente mostrano più movimento al buio e meno movimento alla luce. Registrare la distanza totale percorsa dalle larve del controllo e dai gruppi di esposizione in ciascun periodo. Se il composto è neurotossico, le larve mostrano ancora più movimento al buio e alla luce rispetto agli animali di controllo.
Nel seguente protocollo, eseguiremo test comportamentali sulle larve di zebrafish esposte a composti neurotossici.
- Almeno 2 ore prima di eseguire un esperimento, impostare la temperatura ambiente a 28 gradi Celsius e aggiungere 800 microlitri di soluzione di esposizione a ciascun pozzetto di una micropiastra a 48 pozzetti. Quindi utilizzare una pipetta da 1 millilitro con una punta modificata per trasferire una larva in 200 microlitri di soluzione di esposizione in ciascun pozzetto della micropiastra, in preparazione per un esperimento di locomozione e angolo di percorso.
Quando tutti i parametri sono stati impostati, abbassare l'illuminazione nella sala di prova e lasciare che le larve si acclimatino nel sistema per 10 minuti. Al termine del periodo di acclimatazione, fare clic su Esperimento ed esecuzione e creare la cartella in cui salvare i file sperimentali. Quindi inserisci il nome del risultato e fai clic su Sfondo e avvia.
Al termine dell'esperimento, fai clic su Esperimento e interrompi. Quindi rimettere la micropiastra a 48 pozzetti nell'incubatore luminoso per gli esperimenti successivi.