Iniezione di Morpholino: un metodo per abbattere l'espressione genica bersaglio per studiare la funzione nel pesce zebra

- Un approccio per determinare la funzione di un gene consiste nell'abbattere la sua espressione e osservarne l'effetto. Gli oligomeri morfolini sono spesso utilizzati negli studi di knock-down nel pesce zebra. Un morfolino è una molecola sintetica simile al DNA lunga circa 25 basi, che inibisce l'espressione genica bersaglio.

Per il trattamento con morfolino, posizionare un pesce anestetizzato con una pinna caudale parzialmente amputata su una piastra di iniezione e posizionare la piastra sotto uno stereomicroscopio. Iniettare solo il lato dorsale mentre il lato ventrale non iniettato funge da controllo. I morfolini possono funzionare in due modi a seconda della sequenza a cui si rivolgono. In primo luogo, si combinano con il sito di inizio della traduzione su un mRNA e impediscono la sintesi proteica bloccando la traduzione.

In secondo luogo, può legarsi alla giunzione introne-esone su un pre-mRNA e impedire il corretto splicing, risultando in un trascritto difettoso che verrà degradato dalla cellula. Successivamente, esamina le pinne caudali per l'escrescenza. Le differenze tra la ricrescita delle regioni trattate con morfolino e non trattate indicano che la proteina bersaglio s