0 visualizzazioni • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Inizia con una vasca di accoppiamento, una vasca con un inserto rimovibile che consente alle uova di cadere. Aggiungi due pesci adulti maschi e tre femmine in una vasca di accoppiamento divisa la sera prima della raccolta degli embrioni per acclimatarsi l'uno all'altro durante la notte.
La mattina successiva, trasferisci il pesce in una nuova vasca di accoppiamento contenente l'acqua del sistema e rimuovi il divisore. Attendi dai 15 ai 30 minuti per dare al pesce il tempo di accoppiarsi e deporre le uova.
Ora raccogli gli embrioni e conservali in una capsula di Petri contenente il mezzo embrionale di Hank. Coltivali a 28,5 gradi Celsius durante tutto il protocollo. Esamina la morfologia degli embrioni al microscopio da dissezione.
Osserverai diverse caratteristiche dello sviluppo. La scissione del blastodisco dà origine a più cellule. Il blastoderma assume la forma di una coppa rovesciata sopra la cellula vitellino. I segmenti parassiali del mesoderma si sviluppano sulla parte dorsale dell'embrione e così via.
Oltre le 24 ore dopo la fecondazione, è sufficiente ordinare gli embrioni in base alla lunghezza totale del corpo. Nel protocollo di esempio, imposteremo l'accoppiamento di pesci reporter transgenici mCherry e selezioneremo gli embrioni risultanti.
- Per iniziare, coltiva gli embrioni fino a tre mesi di età, che è la maturità riproduttiva. Segregatare due pesci maschi adulti e tre femmine del ceppo desiderato in vasche di accoppiamento divise di acqua fresca del sistema la sera prima della raccolta degli embrioni. La mattina seguente, dopo l'accensione delle luci, rimuovere il divisorio e lasciare che i pesci si accoppino naturalmente fino a quando non si osservano embrioni sul fondo della vasca.
Raccogliere gli embrioni a intervalli di 30 minuti e separare le piastre di Petri del mezzo embrionale fino a quando non viene raccolto il numero desiderato. Per mettere in scena gli embrioni, coltivarli in gruppi da 50 a 75 per capsula di Petri da 10 centimetri per promuovere tempi di sviluppo coerenti di tutti gli embrioni. Quindi mantieni le piastre a 28,5 gradi Celsius.
Misurare l'età dell'embrione utilizzando il numero di somite dopo la segmentazione fino a circa 24 ore dopo la fecondazione, o HPF, e separare gli embrioni in base all'età di sviluppo.