Microscopia a foglio leggero Preparazione del campione: montaggio di embrioni vivi di pesce zebra per l'imaging a lungo termine

- Per prima cosa, prepara l'agarosio aggiungendo un terreno E3, che fornisce calcio agli embrioni dechorionati all'agarosio fuso. Quindi, aggiungi MS222 per anestetizzare gli embrioni. Raffreddare la miscela di agarosio a 38 gradi Celsius, prossima a solidificarsi. Seleziona alcuni embrioni dechorionati che esprimono proteine fluorescenti e trasferiscili nella miscela di agarosio.

Quindi, inserire completamente uno stantuffo in un capillare di vetro e aspirare un embrione, assicurandosi che entri per primo nella testa. Una volta che l'agarosio si è solidificato, utilizzare del nastro adesivo per tenere il capillare in posizione verticale in un becher contenente terreno E3. Il fondo capillare aperto favorisce lo scambio di gas per il campione di embrione.

Posizionare il capillare nel portacampioni di un microscopio a fluorescenza a foglio leggero. Il laser forma un sottile foglio di luce, consentendo a un obiettivo di rilevamento, posizionato perpendicolarmente al campione, di catturare un'immagine in sezione trasversale. Nel protocollo di esempio, monteremo embrioni di pesce zebra per visualizzare l'occhio in via di sviluppo.

Iniziate con la preparazione dell'agarosio. Fondere un'a