Dissezione del cristallino: una tecnica per osservare la morfologia del cristallino del pesce zebra

- L'occhio di un pesce zebra comprende cornea, sclera, cristallino e retina. La cornea è un tessuto trasparente che consente alla luce di entrare nell'occhio. La sclera è un tessuto opaco che è continuo con la cornea, formando uno strato protettivo esterno. La lente è una struttura sferica che focalizza la luce sulla retina, che è uno strato di tessuto sensibile alla luce che converte la luce in un segnale neurale.

Per sezionare l'occhio, riempi una piastra di Petri con silicone e lasciala solidificare. Ora, metti un pesce anestetizzato nel piatto e asporta gli occhi usando una microforbice. Trasferire gli occhi in una piastra riempita di PBS per mantenere un pH costante nel tessuto e orientare l'occhio con il lato posteriore rivolto verso l'alto. Tenere l'occhio con una pinza ed eseguire con cura tre tagli radiali attraverso la sclera e la retina.

Quindi, piega il fazzoletto per rivelare la lente. Ora, posiziona l'occhio con il lato anteriore rivolto verso l'alto e rimuovi la sclera e la retina. Estrarre la lente dall'occhio sezionato e rimuovere l'eventuale tessuto rimanente intorno ad essa. Nel seguente protocollo, eseguiremo dissezioni del cristallino larvale e adulto di pesce zebra per analizzare la morfologia del cristallino.

Dopo la conferma di una sedazione sufficiente con tricaina, utilizzare le forbici da microdissezione per asportare immediatamente entrambi gli occhi da un pesce zebra adulto o larvale e posizionare entrambi gli occhi in una capsula di Petri da 35 millimetri su misura con uno stampo di dissezione in silicone riempito con PBS. Per prelevare la lente da un pesce zebra adulto, posizionare l'occhio con il lato posteriore rivolto verso l'alto e inserire una pinza con un angolo inferiore a 45 gradi attraverso il disco ottico. Usa le forbici da dissezione per fare due o tre incisioni radiali attraverso la retina e la sclera dal disco ottico alla zona ciliare nell'occhio immobilizzato e staccare la retina e la sclera come petali di fiori. Capovolgere l'occhio, con la cornea rivolta verso l'alto, e utilizzare il lato piatto delle forbici per immobilizzare la lente indirettamente tramite la manipolazione della sclera e della cornea mentre si utilizza una pinza per estrarre la retina e i tessuti attaccati. Quindi tagliare con cura il tessuto in eccesso dalla lente.

Per la raccolta della lente larvale del pesce zebra, riproduce un occhio larvale con il lato posteriore rivolto verso l'alto sulla parte piatta di un piatto di silicone di PBS. E usa un ago di tungsteno affilato per fare tagli radio attraverso la retina e la sclera mentre immobilizzi l'occhio con un altro ago o una pinza. Quindi raccogliere delicatamente la lente dall'occhio dissociato con il lato smussato di un ago di filo di tungsteno su misura e tirare via con cautela il tessuto attaccato.