0 visualizzazioni • 2:53 min. • April 30th, 2023
- Digiunare un pesce adulto per 24 ore prima dell'iniezione per svuotare il tratto gastrointestinale e creare ulteriore spazio nell'addome. Il giorno della procedura, anestetizzare il pesce con tricaina e metterlo in una fessura in una spugna bagnata con il lato ventrale rivolto verso l'alto.
Quindi, pipettare la quantità desiderata di soluzione iniettabile su un pezzo di pellicola da laboratorio e inserirla in un ago da insulina. Posizionare l'ago tra le pinne pelviche a un angolo di 45 gradi rispetto all'asse antero-posteriore del corpo e spingerlo delicatamente verso l'interno sulla linea mediana. Far avanzare l'ago di circa 1 o 2 millimetri nella cavità addominale, lo spazio tra la parete addominale e gli organi interni, e iniettare lentamente la soluzione di interesse. Attendere cinque secondi prima di estrarre l'ago per evitare fuoriuscite. Ora, rimuovi con cura l'ago.
Dopo l'iniezione, trasferire rapidamente il pesce in una vasca di recupero contenente acqua fresca della vasca. Se il pesce non inizia a nuotare immediatamente, fai roteare l'acqua vicino alle branchie per aiutarlo a riprendersi dall'anestesia. Nel protocollo di esempio, inietteremo una soluzione di mycobacterium marinum in un pesce mutante RAG1 per studiare l'infezione.
- Per prima cosa, versare una gocciolina da 5 microlitri della soluzione batterica diluita su un pezzo di pellicola di paraffina. Quindi, tirare la gocciolina in un ago da insulina calibro 30. Usa un pesce di età compresa tra cinque e otto mesi per questo esperimento, uno dei quali è un pesce di tipo selvatico e l'altro è un pesce mutante RAG.
Posiziona questi pesci con il lato ventrale rivolto verso l'alto nelle fessure di un pezzo di plastica espansa umida. Iniettare l'ago da insulina tra le pinne pelviche con un angolo di 45 gradi. Tenere l'apertura dell'ago verso l'alto per assicurarsi che l'intera apertura sia all'interno della cavità addominale. Quindi, iniettare lentamente la soluzione batterica. Dopodiché, rimuovere con cura l'ago e trasferire immediatamente il pesce in una vasca di recupero riempita con acqua fresca della vasca.
Prelevare campioni dall'aliquota batterica in uso ogni 15 minuti su piastre 7H10. Incubare questi campioni a 29 gradi Celsius per cinque giorni per verificare la dose di infezione. Controlla regolarmente il benessere dei pesci, assicurandoti di sopprimere tutti i pesci con sintomi di infezione incubandoli in acqua con più dello 0,02% di estere etilico dell'acido 3-amminobenzoico.