Microiniezione di embrioni: una tecnica per somministrare un composto nel tuorlo di pesce zebra

- Metti due pesci femmina e due maschi in una vasca di riproduzione divisa una notte prima dell'iniezione. La mattina seguente, togliete il divisorio e lasciate che i pesci si riproducano fino a quando non osserverete le uova sul fondo della vasca. Raccogli le uova e lavale con un terreno E3 contenente blu di metilene, un fungicida. Osserva le uova al microscopio e rimuovi le uova non fecondate. Le uova non fecondate hanno una membrana del tuorlo chiara, mentre le uova fecondate hanno una membrana del tuorlo scura.

Tenere 10 embrioni in una capsula di Petri separata come controlli non iniettati. Utilizzando una pipetta di trasferimento, allineare gli embrioni nella vasca di una piastra per microiniezione a temperatura ambiente e posizionarla al microscopio. Spingere delicatamente l'ago per microiniezione attraverso il corion nel tuorlo e iniettare lentamente un composto di interesse contenente un marcatore come il rosso fenolo. Il flusso citoplasmatico consente al composto di diffondersi nelle cellule embrionali.

Dopo l'iniezione, far crescere gli embrioni in terreno E3 con blu di metilene a 28 gradi Celsius. Continua a controllare la salute degli embrioni. Rimuovi gli embrioni mor