Iniezione intratoracica: somministrazione di composti al cuore adulto di pesce zebra

- Per iniziare, posiziona una spugna bagnata con una fessura su una capsula di Petri. Quindi, anestetizzare un pesce adulto con una soluzione di tricaina e trasferirlo con cura nella fessura con il lato ventrale rivolto verso l'alto. Metti la capsula di Petri sotto uno stereomicroscopio e osserva il movimento del cuore che batte sotto la pelle.

Posizionare un ago per mincroiniezione a un angolo di 45 gradi rispetto all'asse del corpo sopra il cuore pulsante situato tra l'opercolo e il cingolo pettorale. Delicatamente, fai avanzare l'ago attraverso la pelle nel pericardio, una sottile membrana che circonda il cuore. Erogare la miscela per iniezione nel pericardio.

Il colpo contiene un colorante tracciante come il rosso fenolo per tracciare il movimento delle soluzioni. Estrarre l'ago dal torace. Trasferire immediatamente il pesce nella vasca di recupero contenente l'acqua del sistema e monitorarla per il completo recupero dall'anestesia. Nel seguente protocollo, eseguiremo un'iniezione intratoracica per somministrare un composto di prova ed esaminare i suoi effetti sulla rigenerazione cardiaca.

- Usa una rete per catturare un pesce adulto e trasferirlo nella soluzione anestetica. Dopo uno o due minuti, quando il pesce smette di nuotare e il movimento dell'opercolo è ridotto, toccare il pesce con un cucchiaio di plastica per assicurarsi che non reagisca ad alcun contatto. Quindi, trasferisci rapidamente e con attenzione il pesce nella scanalatura della spugna bagnata con il lato ventrale rivolto verso l'alto. La testa del pesce deve essere rivolta lontano dalla mano dominante dell'operatore.

Sotto lo stereomicroscopio, osservare attentamente il movimento del cuore che batte sotto la pelle del pesce. Visivamente, determinare il punto di iniezione sopra il cuore pulsante e al centro del triangolo definito dalle placche cartilaginee ventrali. Inserire la punta del capillare con un angolo compreso tra 30 e 45 gradi rispetto all'asse del corpo. Penetrare delicatamente la pelle con la punta del microcapillare nel pericardio.

Una volta che l'ago è all'interno del pericardio, premere il pedale del dispositivo microiniettore per completare l'iniezione. Dopo l'iniezione, estrarre delicatamente il capillare dal torace e trasferire immediatamente il pesce in una vasca con acqua di sistema per il recupero. Monitorare i pesci fino al completo recupero dall'anestesia. Per analizzare gli effetti dell'iniezione, raccogliere il cuore nel momento desiderato e prepararlo per ulteriori analisi.