0 visualizzazioni • 3:21 min. • April 30th, 2023
- Uno xenotrapianto è un organo o un tessuto prelevato da una specie e trapiantato in un'altra. Uno xenotrapianto derivato da paziente, o PDX, è un modello di cancro in cui il tessuto del tumore di un paziente viene impiantato in un animale immunodeficiente, come una larva di pesce zebra il cui sistema immunitario non è completamente sviluppato, per studiare la progressione del tumore o l'efficacia del farmaco. Innanzitutto, anestetizzare le larve 48 ore dopo la fecondazione in una soluzione di tricaina e trasferire una larva su una piastra di iniezione contenente agarosio a base di terreno E3.
Successivamente, caricare la sospensione delle cellule di innesto del paziente e trasferirla in un ago microcapillare. Al microscopio, iniettare le cellule nel sacco vitellino della larva utilizzando un ago microcapillare. Ora, coltivare le larve iniettate in una soluzione E3 contenente glucosio e L-glutammina, che supporta l'elevata richiesta di energia delle cellule xenotrapiantate.
Per il trattamento farmacologico, trasferire le larve xenotrapiantate in una piastra a pozzetti, dividere i pozzetti in gruppi in base al numero e alle dosi di composti che devono essere testati e aggiungere i composti. Includi un gruppo di controllo. Incubare le larve trattate a 32 gradi Celsius prima di osservare i risultati del trattamento.
Nel seguente protocollo, studieremo i farmaci gemcitabina e navitoclax in un modello zPDX di cancro al pancreas.
- Dopo aver anestetizzato le larve di zebrafish, trasferirle nella piastra di iniezione, che viene riempita con E3 modificato. Prelevare 25 microlitri della sospensione di cellule miste nell'ago microcapillare e inserire l'ago nel manipolatore per microiniezione. Impostare la pressione e il tempo di iniezione e iniettare da 50 a 80 cellule nel sacco vitellino di 48 ore dopo la fecondazione del pesce zebra.
Trasferire le larve di zebrafish post-xenotrapianto in 40 millilitri di soluzione miscelata a 32 gradi Celsius. Mettere 10 larve xenotrapiantate in ciascun pozzetto di una piastra a 12 pozzetti. Quindi, dividi le larve in quattro gruppi.
Trattare il gruppo di controllo con E3 contenente lo 0,1% di DMSO e trattare gli altri gruppi con gemcitabina e/o navitoclax. Incubare tutte le larve a 32 gradi Celsius per due giorni. Dopo aver anestetizzato le larve xenotrapiantate dopo il trattamento, metterle in metilcellulosa al 3%.
Utilizzare un microscopio a fluorescenza o confocale per visualizzare le larve dalla vista laterale. Quindi, utilizzare il software Image J e Graph Pad per quantificare l'intensità dei segnali fluorescenti rossi e verdi.