Dissezione cerebrale del pesce zebra: una tecnica di neurobiologia dei pesci

- Posiziona un pesce soppresso su un letto di dissezione e usa una lama chirurgica per decapitare il pesce a livello delle branchie. Tieni la testa con il lato ventrale rivolto verso l'alto e rimuovi i tessuti molli fino a vedere il chiasma ottico, una struttura fatta di nervi ottici che collega il cervello agli occhi.

Tagliare i nervi ottici e rimuovere gli occhi. Ora, orienta il pesce con il lato dorsale rivolto verso l'alto e rimuovi le parti del cranio per isolare il cervello. Trasferire il cervello in una capsula di Petri contenente un mezzo di dissezione per mantenere un pH costante del tessuto. Osserva le parti del cervello.

I bulbi olfattivi sono una coppia di strutture all'estremità anteriore collegate agli organi olfattivi che rilevano i segnali olfattivi. Il telencefalo comprende aree legate alla memoria. L'habenula trasmette informazioni dal telencefalo ad altre parti del cervello.

Il tectum ottico è un centro di elaborazione delle informazioni sensoriali. Il cervelletto svolge un ruolo nella funzione motoria somatica e nell'equilibrio. E il midollo trasmette le informazioni dal midollo spinale al cervello. Nel seguente protocollo, isoleremo il cervello di un pesce zebra adulto per raccogliere cellule staminali neurali da diverse regioni.

Per iniziare, prepara un letto di dissezione riempiendo una capsula di Petri con impacchi di gel. Quindi coprire il piatto con il coperchio corrispondente e incubarlo a meno 20 gradi Celsius. Una volta che il gel è congelato, togli il piatto dal congelatore e posiziona un quadrato pulito di carta da filtro sopra il coperchio. Procedete ad avvolgere sia la carta che il piatto con pellicola trasparente.

Successivamente, trattare tutti gli strumenti di microdissezione con etanolo al 70%. Posiziona questi strumenti sterilizzati accanto a un microscopio da dissezione e posiziona il letto di dissezione completato sotto il microscopio con illuminazione a fibre ottiche. Posizionare immediatamente un campione di testa precedentemente preparato sopra il letto di dissezione e orientarlo in modo che il suo lato dorsale sia rivolto verso il basso.

Quindi usa le forbici per eseguire un taglio longitudinale attraverso i tessuti molli dalla parte posteriore della testa alla bocca. Successivamente, esporre la base del cranio con una pinza e rimuovere tutto il tessuto adiacente. Quindi, taglia una delle pareti laterali del cranio partendo dalla parte posteriore della testa e spostandoti verso la regione tectum del cervello. Ripeti questo processo per il lato controlaterale. Procedere al taglio del nervo ottico. E poi rimuovere i due lati più laterali del cranio a livello del tectum

Infine, gira la testa con il lato ventrale rivolto verso l'alto. E con una pinza, staccare la parte più apicale del cranio per esporre il cervello. Successivamente, trasferire il cervello e le parti rimanenti del cranio in un piatto contenente un mezzo di dissezione composto da DMM F12 integrato con penicillina streptomicina. Con il manico di plastica di un microcoltello al microscopio, pulisci il tessuto cerebrale, facendo attenzione a non danneggiare le strutture neurali. Usa fino a due cervelli di pesce zebra per generare neurosfere derivate dall'intero cervello.