Generazione di mammosfere primarie: una tecnica per determinare la potenza cellulare

Una singola cellula staminale del cancro al seno dà origine a un gruppo di cellule chiamato mammosfera primaria. Per ottenerli, prima coltiva una linea cellulare di cancro al seno fino al 70% all'80% confluente, per garantire che le cellule siano nella loro fase di crescita. Aggiungere Tripsina-EDTA per staccare le cellule dal pallone e aggiungere un terreno con siero per fermare l'azione della tripsina.

Ora, prendete le celle in una provetta e centrifugatele per ottenere il pellet cellulare. Risospendere il pellet nel terreno della mammosfera senza siero e far passare la sospensione attraverso un filtro a cappello cellulare, per ottenere una sospensione a singola cellula. Questa sospensione è costituita da cellule staminali, cellule progenitrici e cellule differenziate che mostrano diverse espressioni proteiche.

CD44 e CD24 sono proteine della superficie cellulare caratteristiche delle cellule staminali del cancro al seno. Sono positivi per l'espressione di CD44 e negativi per CD24. Isolare le cellule dalla sospensione cellulare utilizzando la fluorescenza o la selezione cellulare attivata magneticamente. Quindi, prendi un'aliquota e una colorazione blu ad tripano sulle cellule e