Trasduzione per marcare le cellule tumorali PDX: introduzione del marcatore fluorescente che esprime lentivirus nella cellula tumorale in vitro

Il lentivirus è un retrovirus che contiene materiale genetico a RNA. Questo virus fornisce un metodo efficiente e stabile per introdurre transgeni nelle linee cellulari tumorali. Inizia aggiungendo la neuraminidasi a una provetta contenente Lentivirus che esprime la proteina fluorescente verde, o GFP. Mantieni la provetta a 37 gradi Celsius per un'ora per aumentare l'efficienza di legame del virus.

Quindi, centrifugare una provetta contenente una sospensione di cellule tumorali per formare un pellet. Aggiungere un terreno mammostatico contenente polibrene per risospendere le cellule. Il polibrene è un polimero cationico che aumenta l'efficienza dell'infezione lentivirale. Ora piastra il numero ottimale di cellule tumorali per pozzetto in una piastra di coltura tissutale a sei pozzetti. Aggiungere la quantità necessaria di Lentivirus in ciascun pozzetto della piastra di coltura.

Agitare la piastra per mescolare il contenuto e mantenerla a 37 gradi Celsius per 96 ore con un apporto continuo di anidride carbonica. Il Lentivirus entra nella cellula e rilascia RNA. La trascrittasi inversa virale converte l'RNA in DNA a doppio filamento che si integra nel genoma ospite. Posizionare la pi