Co-coltura 3D con interazione diretta: co-coltura di cellule tumorali con monociti per studiarne l'interazione

Per iniziare, aggiungi DQ collagen IV, un substrato proteico spento con colorante fluorescente in un estratto di matrice extracellulare o ECME. Versare questo estratto in ogni pozzetto di un vetrino a due pozzetti. Etichettare il primo bene come co-cultura, il secondo come controllo. Aggiungere una quantità appropriata di sospensione di cellule tumorali marcate in fluorescenza nei pozzetti e incubare il vetrino a 37 gradi Celsius per il tempo desiderato per favorire l'adesione delle cellule.

Aggiungere una quantità necessaria di sospensione cellulare di monociti al primo pozzetto. Lasciare solidificare l'ECME a 37 gradi Celsius. Versare rapporti uguali di cellule tumorali e terreni di coltura di monociti in ciascun pozzetto e incubare il vetrino a 37 gradi Celsius per la durata desiderata in un ambiente di anidride carbonica. Nel pozzetto di co-coltura, le cellule tumorali secernono proteine come la proteina chemioattrattiva dei monociti per attirare i monociti.

Al contrario, i monociti producono metalloproteinasi di matrice o MMP, per degradare il collagene, promuovendo l'invasione delle cellule tumorali. Osservare il vetrino al microscopio confocale. La degradazione del collagene