Iniezione intraduttale: erogazione di una miscela per iniezione nei dotti della ghiandola mammaria del topo

Un'iniezione intraduttale è una tecnica di somministrazione di una miscela di iniezione che può contenere cellule tumorali, vettori di espressione o un agente terapeutico integrato con un colorante tracciante nei dotti della ghiandola mammaria.

Per questa procedura, caricare una siringa con la miscela per iniezione. Quindi, posizionare un topo anestetizzato con il lato ventrale rivolto verso l'alto su un letto chirurgico. Praticare un'incisione sulla pelle tra l'inguinale o il quinto paio di ghiandole mammarie. Separare con cura il lembo cutaneo dal peritoneo parietale per visualizzare l'albero duttale.

Usando una pinza, sollevare il capezzolo e tagliare con cura la sua parte esterna per vedere l'apertura del condotto. Utilizzare una pinzetta per sollevare il bordo del lembo cutaneo e inserire delicatamente l'ago della siringa nel capezzolo per erogare la miscela per iniezione. Monitorare il movimento del colorante tracciante nell'albero duttale mammario. Il colorante si diffonde nell'albero duttale senza fuoriuscire nello stroma, indicando un successo dell'iniezione.

Attendere qualche secondo per evitare fuoriuscite, quindi rimuovere lentamente l'ago dal sito di iniezione. Chiudere l'incisione con la clip della ferita. Nel seguente protocollo, eseguiremo un'iniezione intraduttale per erogare l'adenovirus che esprime Cre nella ghiandola mammaria del topo.

Utilizzare tecniche asettiche durante tutta la procedura chirurgica. Praticare un'incisione sulla pelle a una lunghezza di circa un centimetro tra le due quarte ghiandole mammarie inguinali. Separare accuratamente il lembo cutaneo dal peritoneo parietale, in modo da visualizzare l'albero duttale mammario.

Tenere con cura il capezzolo con una pinza da orologiaio per rimuovere il capezzolo esterno senza tagliare la pelle vicina utilizzando una forbice per microdissezione. Caricare da tre a cinque microlitri di miscela per iniezione di adenovirus Cre in una siringa Hamilton da 25 microlitri con un ago con mozzo metallico calibro 33 fissato.

Stimare il volume della miscela iniettabile nella siringa in base al colorante blu contenuto nella miscela. Tenere delicatamente il bordo del lembo cutaneo con una pinzetta curva fine e iniettare lentamente la miscela per iniezione di adenovirus Cre nel capezzolo, monitorando la diffusione del colorante blu nell'albero duttale mammario. Mantenere la velocità di iniezione il più lenta possibile per evitare danni al lume duttale.

Una corretta iniezione intraduttale è indicata dai fluidi iniettati che si diffondono in tutto l'albero duttale senza fuoriuscire nel compartimento stromale. Estrarre delicatamente l'ago dal capezzolo per evitare perdite del fluido iniettato. Esaminare il lato distale della ghiandola mammaria o l'area circostante il capezzolo iniettato.

Il colorante che si diffonde nello stroma vicino, come mostrato qui, indica un'iniezione di cuscinetto adiposo mammario piuttosto che un'iniezione intraduttale riuscita. Chiudere le ferite chirurgiche e la pelle con clip per ferite.

Rimuovi il mouse dall'anestesia e posizionalo su un termoforo all'interno di una gabbia pulita per il recupero. Monitorare lo sviluppo del tumore mammario come descritto nel protocollo di testo.