zPDX-Analisi dell'invasività: studio del comportamento invasivo delle cellule tumorali metastatiche negli xenotrapianti di embrioni di zebrafish

0 views • 2:25 min • April 30th, 2023

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Gli xenotrapianti di embrioni di zebrafish sono utili nello studio dell'invasione delle cellule tumorali. Preparare modelli di xenotrapianto iniettando cellule tumorali metastatiche marcate in fluorescenza e cellule non cancerose nello spazio perivitellino di due embrioni transgenici. Lo spazio perivitellino è uno spazio tra il periderma dell'embrione e il sacco vitellino. Lascia che gli embrioni crescano per il periodo desiderato.

Durante questo periodo, le cellule tumorali metastatiche si dividono in modo aggressivo nel sito di iniezione, mentre le cellule non cancerose rimangono stabili. Dopo l'incubazione, utilizzare una pipetta pasteur per trasferire gli embrioni in una capsula di sospensione con fondo di vetro. Rimuovere l'acqua d'uovo in eccesso e posizionare gli embrioni nella posizione desiderata per l'imaging. Tieni un vetrino coprioggetti sopra il piatto e posizionalo sotto un microscopio a campo chiaro.

Acquisisci immagini e analizza il comportamento invasivo di entrambi i tipi di cellule. Le cellule tumorali metastatiche tendono a invadere i vasi sanguigni dal sito di iniezione. Si muovono lungo la circolazione e poi invadono il tessuto circostante per proliferare. Al contrario, le cellule non cancerose rimangono nel sito di iniezione. Nel protocollo di esempio, inietteremo cellule di cancro al seno nello spazio perivitellino e nel dotto di Cuvier in modelli di xenotrapianto di zebrafish per studiare le metastasi.

Per visualizzare le metastasi, con una pipetta Pasteur, trasferire l'embrione di pesce zebra iniettato in una capsula di polistirene con fondo di vetro e rimuovere l'acqua d'uovo in eccesso. Visualizzare l'intero corpo dell'embrione con un microscopio confocale impostato a basso ingrandimento per ottenere un modello generale di disseminazione delle cellule tumorali.

Utilizzare un laser a 488 nanometri per visualizzare la vascolarizzazione dell'embrione di zebrafish e un laser a 543 nanometri per visualizzare le cellule tumorali impiantate etichettate con un marcatore fluorescente rosso. Successivamente, scansiona l'embrione in otto-dieci passaggi per acquisire un'immagine di alta qualità.

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Last updated: 27 June 2026