Inflazione dell'inchiostro di India: un metodo di colorazione per visualizzare i noduli tumorali

0 visualizzazioni3:07 min • April 30th, 2023

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Inizia posizionando un topo soppresso con il lato ventrale rivolto verso l'alto su un letto chirurgico e fissando gli arti dell'animale. Usando le forbici, taglia lungo la linea mediana attraverso la gabbia toracica fino alle ghiandole salivari. Posizionare un puntale di pipetta sotto la trachea per sollevarla e isolarla. Ruotare il piano operatorio di 180 gradi. Inserisci un ago per siringa contenente una macchia di inchiostro di china nella trachea e inietta l'inchiostro nei polmoni fino a quando non senti resistenza.

Le cellule tumorali secernono una grande quantità di acido lattico che genera una forte carica negativa sulla superficie cellulare. Quando queste cellule sono colorate con inchiostro di china, una macchia acida, la superficie cellulare respinge la macchia e rimane intatta.

Usa le forbici per tagliare la trachea e fai scorrere un paio di pinzette sotto i polmoni. Estrarre delicatamente i polmoni dal corpo dell'animale. Sciacquare i polmoni in acqua e trasferirli in una fiala contenente la soluzione di Fekete per rimuovere la macchia in eccesso e fissare il fazzoletto in una cappa aspirante. I noduli tumorali appaiono bianchi sullo sfondo scuro.

Nel seguente protocollo, eseguiremo la tecnica di gonfiaggio dell'inchiostro di china per convalidare le metastasi polmonari.

Per convalidare le metastasi del tumore primario al polmone, posizionare prima il topo in posizione supina su una tavola di polistirene e fissare le gambe per garantire un accesso senza ostacoli alla trachea. Spruzzare il mouse con etanolo al 70%. Quindi, usa un paio di forbici per praticare un'incisione lungo la linea mediana dell'addome medio del topo attraverso la gabbia toracica e verso le ghiandole salivari. Identificare la trachea. Quindi, usa una pinza per rimuovere i tessuti circostanti.

Quindi, tenendo la punta di una pipetta in una mano, infilare la punta sotto la trachea e sollevare delicatamente il tessuto verso l'alto e allontanarlo dal corpo. Mantenendo la trachea sollevata, ruotare la piattaforma di dissezione di 180 gradi. Quindi, inserire una siringa di tubercolina da mezzo cc calibro 27 nella trachea e gonfiare completamente i polmoni con inchiostro di china fino a quando non si avverte una forte resistenza.

Quindi, usando un paio di forbici, taglia la trachea. Tenendo il mouse in posizione con una pinza, inserire un'altra pinza sotto i polmoni ed estrarre i lobi polmonari dal mouse. Sciacquare brevemente i polmoni in un becher d'acqua e trasferire il fazzoletto in una cappa aspirante. Quindi, mettere i polmoni in una fiala di vetro a scintillazione contenente 3 millilitri di soluzione di Fekete, tappando la fiala per evitare che la soluzione evapori. Dopo alcuni minuti, trasferire i polmoni in una capsula di Petri e contare il numero di singoli noduli tumorali bianchi metastatici.

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Ultimo aggiornamento: 22 agosto 2026