India Inktinflatie: een kleuringsmethode om tumorknobbeltjes te visualiseren

Begin met het plaatsen van een geëuthanaseerde muis ventrale kant omhoog op een chirurgisch bed en het vastzetten van de ledematen van het dier. Snijd met een schaar langs de middellijn door de ribbenkast tot aan de speekselklieren. Plaats een pipetpunt onder de luchtpijp om deze te verheffen en te isoleren. Draai het operatiebed 180 graden. Steek een spuitnaald met een India inktvlek in de luchtpijp en injecteer de inkt in de longen totdat u weerstand voelt.

Kankercellen scheiden een grote hoeveelheid melkzuur af die een sterke negatieve lading op het celoppervlak genereert. Wanneer deze cellen zijn bevlekt met India-inkt, een zure vlek, stoot het celoppervlak de vlek af en blijft deze onbevlekt.

Gebruik een schaar om de luchtpijp te knippen en schuif een pincet onder de longen. Trek voorzichtig de longen uit het lichaam van het dier. Spoel de longen af in water en breng ze over in een flacon met de oplossing van Fekete om overtollige vlekken te verwijderen en het weefsel in een zuurkast te bevestigen. De tumorknobbeltjes lijken wit tegen de donkere achtergrond.

In het volgende protocol zullen we de India inktinflatietechniek uitvoeren om longmetastasen te valideren.

Om de uitzaaiingen van de primaire tumor naar de long te valideren, plaatst u eerst de muis in de liggende positie op een polystyreenplaat en bevestigt u de benen om een onbelemmerde toegang tot de luchtpijp te garanderen. Besproei de muis met 70% ethanol. Gebruik vervolgens een schaar om een incisie te maken langs de middellijn van de middenbuik van de muis door de ribbenkast en omhoog naar de speekselklieren. Identificeer de luchtpijp. Gebruik vervolgens een tang om de omliggende weefsels te verwijderen.

Houd vervolgens een pipetpunt in één hand, rijg de punt onder de luchtpijp en til het weefsel voorzichtig op en weg van het lichaam. Houd de luchtpijp omhoog, draai het ontleedplatform 180 graden. Steek vervolgens een halve cc 27-gauge tuberculinespuit in de luchtpijp en blaas de longen volledig op met India-inkt totdat een sterke weerstand wordt gevoeld.

Knip vervolgens met een schaar de luchtpijp door. Houd de muis op zijn plaats met één tang, steek een andere tang onder de longen en trek de longlobben uit de muis. Spoel de longen kort af in een beker water en breng het weefsel over in een zuurkast. Plaats vervolgens de longen in een glazen scintillatieflacon met 3 milliliter fekete's oplossing, waarbij de flacon wordt afgedekt om te voorkomen dat de oplossing verdampt. Breng na een paar minuten de longen over in een petrischaal en tel het aantal enkele, witte, gemetastaseerde tumorknobbeltjes.