Saggio di formazione di colonie di agar morbido: un metodo per testare gli effetti di nuovi composti sulla proliferazione delle cellule tumorali

Per iniziare, prendi una concentrazione appropriata di agarosio fuso in una provetta conica e aggiungi la quantità desiderata di terreno di coltura caldo. Capovolgere delicatamente per amalgamare il contenuto. Aggiungere questa miscela in ogni pozzetto di una piastra a sei pozzetti e lasciarla solidificare. Questo è lo strato inferiore. Successivamente, trattare le cellule tumorali con il composto di interesse e aggiungere la concentrazione richiesta di agarosio.

Ora, versa questa miscela contenente il numero desiderato di cellule per millilitro in ogni pozzetto. Questo è un livello contenente celle. Una volta che il terreno si è solidificato, incubare la piastra a 37 gradi Celsius per una settimana. Preparare uno strato di alimentazione mescolando l'agarosio al terreno e integrare questa miscela con il composto di interesse. Aggiungere delicatamente questo strato di alimentazione in ogni pozzetto, lasciarlo solidificare e incubare la piastra a 37 gradi Celsius.

Ripeti questa procedura di alimentazione settimanalmente per reintegrare le cellule con il terreno fino a formare colonie. Se il composto di interesse è un inibitore della tumorigenicità, sopprimerà la crescita cellulare co