Saggio di immunofluorescenza CTC: una tecnica per caratterizzare le cellule tumorali circolanti

- Per iniziare, diluire le cellule tumorali circolanti isolate o CTC alla concentrazione richiesta utilizzando una soluzione anti-legame che protegge le cellule dal taglio dei liquidi e dai danni da pressione. Quindi, assemblare un vetrino da microscopio rivestito in polilisina e una scheda filtrante per citocentrifuga in un gruppo imbuto per citocentrifuga. Trasferire la sospensione cellulare nella porta dell'imbuto dell'assemblaggio, seguita dalla citocentrifugazione.

La forza centrifuga concentra e deposita un monostrato di cellule su un'area circolare del vetrino. Isolare l'area depositata con le cellule utilizzando un isolatore in silicone. Una volta asciutte, fissare le cellule utilizzando la paraformaldeide. Successivamente, incubare le cellule con una soluzione bloccante adatta contenente proteine che si legano facilmente a qualsiasi sito di legame non specifico sulla superficie cellulare.

Ora, etichettare le cellule con una soluzione di anticorpi marcati con fluorescenza di interesse. Gli anticorpi marcati con fluorofori riconoscono e si legano a specifiche molecole bersaglio sulla superficie cellulare. Lavare il campione per rimuovere eventuali anticorpi non legati. Aggiu