JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Ricerca sul cancro
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- Per prima cosa, posiziona un topo soppresso su una tavola di dissezione. Proprio sopra l'addome, tagliare la pelle e il peritoneo. Forare il diaframma e tagliare lungo le costole e la gabbia toracica fino alla trachea. Crea una piccola incisione nella trachea. Inserire delicatamente un ago all'interno della trachea senza ferire la carena e fissarlo con una pinza. Iniettare l'agarosio a basso punto di fusione a temperatura corporea normale all'interno dei polmoni. Rimuovere lentamente la siringa e tenere l'ago all'interno per evitare il riflusso dell'agarosio.
Versare il PBS freddo sui polmoni per favorire la gelificazione dell'agarosio. Rimuovere l'ago e fissare la trachea con una pinza per evitare il riflusso dell'agarosio non solidificato. Taglia lo sterno, tieni la trachea con una pinza e tagliala con le forbici. Estrarre i polmoni dalla cavità toracica. Separare i lobi nel supporto. Posizionare all'interno dei pozzetti di imaging in condizioni fisiologiche per microscopia. L'agarosio preserva la morfologia polmonare a temperature fisiologiche che aiutano ad osservare le interazioni cellulari vive. Nel seguente protocollo, dimostreremo l'imaging dal vivo ex vivo dei polmoni pe
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