Aumento della dose: un metodo per sviluppare la resistenza ai farmaci nelle cellule tumorali

- Gli inibitori della tirosin-chinasi, TKI, bloccano il legame del recettore chinasico con l'ATP, impedendo la fosforilazione. Inizia con la placcatura delle cellule tumorali nei terreni di crescita. Lasciare che raggiungano una densità favorevole e trasferire le cellule in più pozzetti. Dopo la crescita notturna, erogare diverse concentrazioni di farmaco in più pozzetti e lasciare che le cellule crescano per la durata desiderata. Aggiungere MTT, un colorante solubile in acqua, per misurare la vitalità cellulare. Gli enzimi mitocondriali convertono l'MTT in formazan viola insolubile all'interno delle cellule viventi.

Arrestare la reazione aggiungendo un agente solubilizzante adatto e misurare la formazan spettrofotometricamente. Questo metodo è chiamato saggio MTT. Tracciare un grafico delle cellule viventi indicate dal formazan rispetto alle concentrazioni di farmaci. Calcola la concentrazione inibitoria, IC₅₀, trovando la concentrazione del farmaco che uccide il 50% delle cellule utilizzando il software.

Successivamente, coltiva le cellule tumorali nel terreno di coltura e distribuiscile in tre diverse piastre. Dopo che le cellule hanno raggiunto la subconfluenza, aggiungere 1/10