Analisi del ciclo cellulare: un approccio per studiare la regolazione del ciclo cellulare delle cellule tumorali polmonari trasfettate con miRNA

- Un microRNA o miRNA è un piccolo RNA non codificante. Dopo la trasfezione o l'introduzione dell'mRNA in una cellula, forma un complesso proteico miRNA. Il complesso prende di mira e si lega a uno specifico mRNA e ne regola negativamente l'espressione, arrestando la progressione del ciclo cellulare.

Per iniziare l'analisi, aggiungere un fissativo disidratante adatto a una coltura raccolta di cellule di cancro del polmone trasfettate con miRNA. Il fissativo preserva le cellule e permealizza anche la membrana cellulare. Trattare le cellule con una miscela di ioduro di propidio, un colorante fluorescente dell'acido nucleico e l'enzima ribonucleasi.

Il colorante entra nelle cellule e colora sia il DNA che l'RNA. L'enzima degrada specificamente l'RNA consentendo una quantificazione ottimale del DNA. Utilizzare un citometro a flusso per determinare la percentuale di cellule arrestate in diverse fasi del ciclo cellulare in base all'intensità di fluorescenza delle singole cellule.

Le cellule in fase di riposo e di crescita hanno un contenuto di DNA inferiore e, quindi, una minore intensità di fluorescenza. Le cellule nella fase Gap 2 con il doppio della quantità di DNA producono il doppio