Preparazione del polmone di topo per citometria a flusso: generazione di sospensioni cellulari dal tessuto polmonare per l'analisi citofluorimetrica

- Inizia prendendo un topo soppresso e fissalo su una tavola di dissezione con del nastro adesivo. Usa le forbici per tagliare la pelle. Fai un'incisione verticale attraverso il diaframma e taglia le costole per raggiungere la cavità toracica esponendo il cuore e i polmoni. Quindi, fai una piccola incisione nel ventricolo sinistro del cuore. Successivamente, individuare il ventricolo destro e inserire una siringa contenente PBS nel lume del ventricolo. Perfondere la PBS attraverso il ventricolo destro lasciando fluire il sangue fuori dall'incisione preformata nel ventricolo sinistro fino a quando i polmoni diventano bianchi. Estrarre il tessuto polmonare contenente noduli tumorali e tritarlo in piccoli pezzi.

Incubare i pezzi nel tampone di digestione polmonare. La collagenasi nel tampone per la digestione polmonare aiuta a isolare le cellule e la DNAsi aiuta a eliminare il DNA dalle cellule morte. Filtrare la sospensione risultante attraverso un filtro cellulare per rimuovere i grumi e rendere uniforme la sospensione cellulare. Centrifugare e risospendere il pellet nel tampone cloruro di ammonio e potassio per lisare gli eritrociti residui. Centrifuga per raccogliere i globuli bia