Saggio di formazione di colonie: valutazione dell'efficacia degli agenti antitumorali sulle cellule tumorali del polmone formanti colonie

- Il saggio di formazione di colonie è un'analisi in vitro di un farmaco antitumorale sulla crescita, la proliferazione e la differenziazione delle cellule tumorali in colonie in mezzi semisolidi. Per iniziare, semina le cellule tumorali nel mezzo RPMI con un integratore per la crescita: siero fetale bovino, o FBS, e antibiotico. Incubare le cellule per la durata richiesta.

Quindi, raccogliere la concentrazione desiderata di cellule in una provetta per microfuge e centrifugare. Risospendere il pellet in PBS. Preparare un terreno a base di metilcellulosa ed erogarlo in diverse provette con FBS per favorire una crescita ottimale.

Aggiungere una quantità appropriata di sospensione cellulare in provette e agitarle per mescolare le cellule con il terreno. Successivamente, aggiungere i composti antitumorali in provette e preparare un controllo aggiungendo DMSO. Tubi a vortice.

Aggiungere questa miscela di cellule alla piastra di coltura e incubare per la durata desiderata. Dopo l'incubazione, aggiungere metiltiazolo difeniltetrazolio bromuro, o MTT, e incubare per un po' di tempo. L'MTT riduce il sale giallo del tetrazolio nelle cellule vitali in cristalli di formazan viola. Le colonie v