Estrazione dei miRNA: un metodo per estrarre i miRNA dal campione di plasma

- I microRNA, o miRNA, sono piccoli RNA non codificanti coinvolti nella regolazione genica. Le loro espressioni sono alterate durante il cancro e quindi sono potenziali biomarcatori del cancro. Per iniziare l'isolamento dei miRNA, prelevare un campione di sangue intero appena raccolto e centrifugare a 4 gradi Celsius per separare il plasma dalle cellule del sangue. Trasferire il surnatante in una nuova provetta e centrifugare nuovamente per ottenere un surnatante plasmatico più chiaro. Estrarre il surnatante, trattare con una soluzione di omogeneizzazione refrigerata, quindi con un tampone di lisi per omogeneizzare il campione. Aggiungere la soluzione dell'enzima proteinasi K per degradare le proteine, in particolare le nucleasi che altrimenti digeriscono l'RNA durante le fasi a valle.

- Quindi, caricare il lisato nell'apposito pozzetto di una cartuccia di estrattore di acidi nucleici specifica per lo strumento preassemblata. Aggiungere la soluzione di DNasi 1 al pozzetto appropriato per eliminare il DNA genomico dal campione. Aggiungere acqua priva di nucleasi al tubo di eluizione montato sulla cartuccia per il condizionamento prima dell'isolamento del miRNA. Caricare il gruppo ca