Colorazione immunoistochimica: un metodo per ottenere informazioni spaziali da sezioni sottili di tessuto

- Inizia posizionando una sottile sezione di tessuto in una soluzione di ammoniaca per consentire un delicato recupero dell'antigene. Trasferire la sezione su un vetrino rivestito in polilisina. Le cellule caricate negativamente si legano alla polilisina caricata positivamente. Successivamente, aggiungi perossido di idrogeno per bloccare l'attività endogena della perossidasi. Lavare il vetrino in soluzione salina Tris-Buffered, TBS.

TBS promuove l'accesso degli anticorpi agli antigeni rompendo i legami incrociati delle proteine. Lavare la sezione con una soluzione a blocchi per ridurre il legame non specifico degli anticorpi. Aggiungere gli anticorpi primari alla sezione e incubare durante la notte. L'anticorpo primario si lega al suo antigene specifico presente sulla superficie cellulare. Lavare il vetrino con TBS.

Aggiungere anticorpi secondari coniugati con biotina che si legano alla regione Fc dell'anticorpo primario. Lavare la sezione con l'enzima streptavidina-biotina perossidasi. Quindi, aggiungere il substrato cromogenico della perossidasi al tessuto. La perossidasi converte il cromogeno in un prodotto colorato insolubile.

Controcolorare il tessuto con una soluzione di emat