Isolamento degli esosomi: una tecnica per separare gli esosomi dal plasma di pazienti con carcinoma polmonare non a piccole cellule

- Gli esosomi sono piccole vescicole legate alla membrana che trasportano biomolecole come lipidi, proteine, DNA, mRNA e microRNA. Gli esosomi vengono rilasciati da diversi tipi di cellule negli spazi extracellulari e possono essere isolati da biofluidi come il plasma.

Per iniziare, centrifugare il campione di plasma per rimuovere cellule e detriti. Trasferire il surnatante al plasma in una nuova provetta. Trattare il plasma con la concentrazione desiderata dell'enzima ribonucleasi. Incubare il campione su un blocco riscaldante a 37 gradi Celsius per una durata adeguata.

L'enzima degrada l'RNA libero nel campione, mentre l'RNA esosomiale rimane protetto. Diluire il campione utilizzando PBS. Quindi, aggiungere la concentrazione desiderata di soluzione enzimatica di proteinasi K e incubare a 37 gradi Celsius per un tempo appropriato. La proteinasi K degrada la maggior parte delle proteine plasmatiche. Inoltre, inattiva l'enzima ribonucleasi precedentemente aggiunto, eliminando così il rischio di degradazione dell'RNA esosomiale durante l'elaborazione a valle.

Aggiungere un volume adeguato di tampone di precipitazione degli esosomi per facilitare la separazione degli esosomi dal plasm