Instillazione e fissazione polmonare: introduzione di liquido nella trachea e fissaggio dei polmoni per misurare il volume polmonare fisso

- L'instillazione polmonare viene utilizzata per introdurre sostanze direttamente nella trachea per analizzare i polmoni di topo con cancro o altre patologie. Per prima cosa, posiziona un topo anestetizzato su una piattaforma di intubazione in pendenza e radere i peli sul collo. Fai una piccola incisione con una forbice sotto il collo e tira delicatamente la pelle usando una pinza per rivelare la trachea. Inserire un catetere nella trachea attraverso la bocca e osservarlo attraverso un'incisione. Iniettare un liquido di esempio nella trachea e gonfiare rapidamente i polmoni introducendo aria con una siringa vuota per distribuire correttamente il liquido.

Chiudi la ferita e metti il topo in una camera di recupero. Dopo il periodo desiderato, sacrificare il topo ed esporre i polmoni. Gonfiarlo con un fissativo per quantificare la capacità polmonare totale. Metti i polmoni in un tubo con un fissativo. Misurare il volume polmonare fisso utilizzando il principio di Archimede. Metti i polmoni nell'acqua e premilo con un dispositivo cablato. Si noti il peso dell'acqua spostata dai polmoni sommersi. La frazione del volume polmonare nel polmone sinistro fisso è solitamente inferiore a quella misurata in vivo.

- Prima di iniziare la procedura, piegare manualmente la punta di una cannula endovenosa commerciale lunga 1 pollice calibro 20 in una leggera curva. Quindi, dopo aver confermato l'anestesia per mancanza di risposta al pizzicamento delle dita, applicare un unguento sugli occhi di un topo adulto e fissare il topo in posizione supina su una piattaforma inclinata con un grande raccoglitore da ufficio e anelli di sutura. Radere la parte ventrale del collo e disinfettare la pelle con alcool al 70%. Quindi, utilizzando forbici affilate, praticare una piccola incisione chirurgica nel collo, circa 12 millimetri sotto l'incisivo inferiore.

Successivamente, usa una pinza per tirare delicatamente la pelle del collo caudalmente fino a quando non si vede la parete ventrale della trachea. Quindi ritrarre delicatamente la lingua e inserire la cannula con la punta piegata inclinata verso la superficie ventrale del topo. Tirando nuovamente delicatamente la pelle del collo come appena dimostrato, inserire la cannula nella trachea. Quando il catetere può essere osservato nella trachea, far avanzare il catetere di circa 5 millimetri per far passare le corde vocali.

Posizionare ora la punta di una pipetta di caricamento del gel caricata con 50 microlitri di instillato nel mozzo inferiore del catetere. Confermare il movimento del fluido nella punta in sincronia con la respirazione del topo, quindi iniettare l'instillato. Utilizzando una siringa da 1 millilitro, gonfiare immediatamente i polmoni con 0,6 millilitri di aria attraverso il catetere per aiutare a distribuire il liquido in profondità nei polmoni, quindi rimuovere la cannula. Chiudere la ferita chirurgica con una piccola quantità di adesivo cianoacrilato e posizionare il topo in una gabbia individuale con monitoraggio fino a quando non si è completamente ripreso.

Dopo l'ultimo punto di tempo sperimentale, praticare un piccolo taglio nel collo dell'animale per esporre il lato ventrale della trachea. Quindi inserire una punta dell'ago calibro 18 nella trachea. Usando il filo, legare l'ago nella trachea e aprire con cura il torace con un'incisione sulla linea mediana. Quindi tagliare il diaframma e rimuovere le pareti laterali del torace per esporre il polmone. Quindi, assicurarsi che non ci sia aria nel tubo di fissaggio facendo scorrere la formaldeide all'estremità del rubinetto. Quindi collegare il serbatoio di formalina e il tubo riempito direttamente all'estremità inferiore dell'ago per tracheostomia.

Posizionare la superficie superiore della formaldeide a 25 centimetri sopra il livello della bocca e aprire il rubinetto per gonfiare i polmoni con un fissativo. Dopo aver lasciato i polmoni sotto pressione per almeno 20 minuti, tirare lentamente indietro l'ago per esporre una parte maggiore della trachea non incannulata mentre si lega la trachea oltre l'estremità dell'ago del tronco. Quando la trachea è saldamente legata, rimuovere il rubinetto e sezionare con cura i polmoni. Quindi immergere i polmoni in formaldeide per una notte.

Qui viene mostrato un tipico dispositivo per mantenere i polmoni in posizione durante il volume polmonare fisso, costituito da pipette di plastica e filo sottile da 20 gauge. Per misurare il volume polmonare fisso, sezionare prima il cuore e qualsiasi altro tessuto non polmonare dai polmoni. Quindi, posizionare un becher contenente circa 200 millilitri d'acqua dotato di un dispositivo di supporto a filo su una bilancia e tarare l'attrezzatura.

Quindi rimuovere il dispositivo, posizionare il polmone sulla superficie dell'acqua e utilizzare il dispositivo per premere il fazzoletto sotto l'acqua facendo attenzione che il polmone, la sutura o qualsiasi parte del dispositivo non tocchino i lati o il fondo del becher. Registrare il peso sulla bilancia. Questo numero riflette il volume d'acqua spostato ed è quindi una misura diretta del volume polmonare. Quindi asciugare il polmone con un tergicristallo, tarare nuovamente il becher con il dispositivo e ripetere la misurazione del volume polmonare. Le due misurazioni del volume devono quindi essere mediate.