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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 5:29 min. • April 30th, 2023
- Prendi un filo funzionalizzato con cellule attaccate sulla sua superficie e colorato mediante colorazione in immunofluorescenza. Lavalo con una soluzione salina ghiacciata, citrato di sodio o SSC. Posizionare il filo in un microtubo contenente sonde con tag fluorescenti e chiuderlo con un fermafilo. Incubare il microtubo in una camera umida e buia in un forno di ibridazione a 75 gradi Celsius per denaturare il DNA all'interno delle cellule.
Trasferire la camera in un forno a 37 gradi Celsius in modo che le sonde si leghino alla sequenza complementare sul DNA. Quindi, rimuovere la camera dal forno ed estrarre il filo. Immergere il filo in un tubo contenente una soluzione SSC alla temperatura desiderata. Lavare il filo con la soluzione SSC contenente Tween per rimuovere le sonde non specifiche o parzialmente ibridate e lavare nuovamente in acqua distillata.
Asciugare il filo e incubare la punta funzionalizzata in soluzione DAPI per colorare i nuclei della cellula. Sciacquare il filo con PBS e asciugare all'aria. Posizionare il filo sotto un microscopio a fluorescenza. La sonda ibridata con il gene di interesse appare come una macchia fluorescente nei nuclei della cellula. Nel segue
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