Saggio XTT: un test colorimetrico per valutare la vitalità cellulare e l'attività mitocondriale

- Le onde ultrasoniche a bassa frequenza portano alla lisi selettiva delle cellule leucemiche umane e il test XTT aiuta a determinare l'entità di questo danno. Il test funziona secondo il principio che gli enzimi mitocondriali delle cellule sane convertono un colorante giallo XTT in un composto arancione chiamato formazano. Per iniziare il test, trattare le cellule con metilbeta-ciclodestrina, un agente che riduce il colesterolo, e successivamente sonicare le cellule a bassa potenza per indurre il danno cellulare.

Centrifugare per pellettizzare le cellule e aggiungere nuovi terreni di coltura cellulare al pellet. Seminare le cellule alla concentrazione desiderata in una micropiastra a più pozzetti e incubarla durante la notte. Ora, aggiungere la soluzione XTT attivata alle cellule e incubare fino a quando il colore arancione non si sviluppa nei pozzetti della micropiastra. Posizionare la piastra in uno spettrofotometro. Misurare l'assorbanza a 450-500 nanometri e poi a 630-690 nanometri. Sottrai i due valori per ottenere risultati precisi. Il valore più elevato di assorbanza nel test XTT indica una maggiore attività degli enzimi mitocondriali e una maggiore vitalità cellulare.

Nel