Saggio di marcatura degli impulsi con bromodeossiuridina: una tecnica per misurare la proliferazione cellulare

- Inizia con una sospensione di cellule leucemiche contenente la densità cellulare desiderata. Centrifugare e risospendere le cellule in un terreno di coltura contenente siero. L'aggiunta di siero favorisce la crescita continua delle cellule e il movimento delle cellule attraverso le diverse fasi del ciclo cellulare. Diluire le cellule in una soluzione di marcatura della bromodeossiuridina, o BrdU, e farle crescere in condizioni fisiologiche per la durata richiesta.

Le cellule in fase di sintesi o fase S assorbono BrdU, un analogo della timidina, che sostituisce la timidina durante il processo di replicazione del DNA. Centrifugare le cellule per rimuovere il BrdU in eccesso e risospendere le cellule in un terreno adatto. Trasferire le cellule in una piastra a pozzetti multipli. Consentire alle cellule di crescere in condizioni fisiologiche per diversi periodi di tempo.

In vari periodi di tempo, le cellule progrediscono attraverso il resto delle fasi S, G2, mitosi e G1 ed entrano nel ciclo cellulare successivo, consentendo la stima della proliferazione cellulare. Eseguire la colorazione degli anticorpi per marcare BrdU con l'anticorpo fluorocromo e misurare la proliferazione cellula