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0 visualizzazioni • 3:24 min. • April 30th, 2023
- La bromodeossiuridina o BrdU è un analogo nucleosidico sintetico della timidina. Durante la fase di sintesi del ciclo cellulare, BrdU sostituisce la timidina e si integra nel DNA appena sintetizzato. Il BrdU incorporato consente il monitoraggio della progressione del ciclo cellulare. Per rilevare il BrdU incorporato, in primo luogo, fissare e permeabilizzare le cellule per renderle permeabili.
Successivamente, trattare le cellule con l'enzima DNAsi per scindere i filamenti di DNA ed esporre il BrdU incorporato. Successivamente, aggiungere un anticorpo anti-BrdU marcato con fluorescenza adatto. L'anticorpo entra nel nucleo e si lega facilmente al BrdU esposto presente nel DNA.
Inoltre, trattare le cellule con un colorante fluorescente adatto che lega il DNA. Il colorante si lega al DNA, consentendo la quantificazione del contenuto totale di DNA. Utilizzare la citometria a flusso per rilevare la fluorescenza sia dal BrdU marcato che dal DNA.
Le intensità di fluorescenza del DNA marcato differenziano le cellule in diverse fasi del ciclo cellulare in base alla variazione del contenuto totale di DNA. Il segnale fluorescente proveniente da BrdU identifica l'attuale posizione del ciclo
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